微小RNA在早期蕈样肉芽肿发病机制中的相关性研究初探及6例肉芽肿性皮肤松弛症临床病理分析

发布时间：2017-09-18 08:42

  本文关键词：微小RNA在早期蕈样肉芽肿发病机制中的相关性研究初探及6例肉芽肿性皮肤松弛症临床病理分析

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【摘要】：蕈样肉芽肿(Mycosis fungoides, MF) MF是原发性皮肤T细胞淋巴瘤(primary cutaneous T-cell lymphoma, CTCL)中最常见的一种,发病机制尚不明确,临床表现多样。经典MF分为斑片期、斑块期、肿瘤期,进展缓慢,早期极易误诊,若治疗不当可能导致病情延误。此外,MF有3种变异型：亲(嗜)毛囊性MF、佩吉特样网状细胞增生症、肉芽肿性皮肤松弛症(granuloma slack skin, GSS)。微小RNA (microRNA, miRNA)是一种长约22个核苷酸的非编码小RNA,参与细胞分化、增殖、代谢、凋亡等几乎所有生命活动,且对很多肿瘤的发病起关键作用。目前发现一些miRNA在MF的发病、辅助诊断、判断预后起重要作用,并对MF的治疗具有潜在价值。第一部分是国内首次探讨miRNA与早期蕈样肉芽肿之间的关系,并初步探讨niRNA在MF发病中可能的作用机制。第二部分对我院诊断的6例GSS进行临床病理分析,以提高大家对该病的认知。第一部分：miRNA在早期蕈样肉芽肿发病机制中的相关性研究初探第一章：筛选与早期MF相关的miRNA目的筛选与早期蕈样肉芽肿相关的microRNA (miRNA)。方法采用高通量miRNA PCR芯片,检测6例早期蕈样肉芽肿(MF)与6例对照(湿疹、扁平苔藓)的皮损中microRNA的表达差异。针对差异表达的nicroRNA,进行组织标本及Myla、Hut-78细胞株的实时荧光定量PCR (RT-qPCR)的验证。结果芯片结果示,相较于对照组,3个microRNA在早期蕈样肉芽肿中显著性高表达:hsa-miR-378a-5p、 hsa-miR-107、hsa-miR-302c-3p,差异有统计学意义(P0.05)。皮损组织的R T-qPCR验证结果与芯片结果一致。与正常人外周血T淋巴细胞相比,Myla细胞株中hsa-miR-378a-5p、hsa-miR-107显著上调,与芯片结果一致；而未见hsa-miR-302c-3p的显著差异性表达。3个miRNA在Hut-78细胞株中均不显著差异性表达。结论与炎症性皮肤病相比,早期蕈样肉芽肿存在差异表达的nicroRNA表达谱。第二章： 生物信息学工具预测hsa-miR-378a-5p的靶基因及可能作用通路目的利用生物信息学工具预测hsa-miR-378a-5p靶基因及信号通路,并进行CTCL细胞株的验证。方法应用TargetScan等数据库进行靶基因预测,并进行GO信号通路富集分析。结合文献检索结果选择hsa-miR-378a-5p的可能靶基因SUFU,IGF1R,及经典MAPK、p38 MAPK信号通路的关键基因ERK1、ERK2、p38,进行CTCL细胞株中RT-qPCR的验证。结果hsa-miR-378a-5p的预测靶基因与细胞的增殖、T细胞分化、凋亡、免疫调节、血管生成等生物学功能密切相关,可能参与TGF-β信号通路、p53信号通路、Wnt信号通路、p38 MAPK信号通路等。对Myla、Hut-78细胞株及正常T淋巴细胞进行RT-qPC R,发现Myla细胞株中SUFU、IGF1R均高表达,有统计学意义(P0.05)；而Hut-78细胞株中均未见显著差异。ERK1、ERK2、p38的RT-qPCR结果是,Myla细胞株中,三者均显著高表达；Hut-78细胞株中,仅ERK1、p38显著高表达(P0.05)。结论通过对hsa-miR-378a-5p的靶基因分析,为hsa-miR-378a-5p在MF中的功能及机制研究提供了线索和理论依据。第三章：hsa-miR-378a-5p基因干扰对MF细胞株Myla的影响目的探讨hsa-miR-378a-5p基因干扰对MF细胞株Myla的影响。方法采用脂质体转染法对Myla细胞株转染niR-378a-5p小干扰RNA(siRNA)、阴性对照(NC)。CCK-8法检测不同处理组的增殖。免疫印迹法测SUFU蛋白在不同处理组的表达水平。结果构建Myla/miR-378a-5p-siRNA组、Myla/NC-siRNA组、未处理Myla组,RT-qPCR结果示Myla/miR-378a-5p-siRNA组的miR-378a-5p表达水平显著抑制。CCK-8结果示24h, Myla/miR-378a-5p-siRNA组的增殖明显下调；而48h、72h、96h三组细胞的增殖情况无显著差异o Myla/miR-378a-5p-siRNA组较于其它两组,SUFU蛋白在24h、48h、72h的表达水平均上调。结论成功构建hsa-miR-378a-5p基因干扰Myla细胞株模型。MF中,SUFU可能不是miR-378a-5p靶基因。第二部分：6例肉芽肿性皮肤松弛症临床及组织病理分析目的分析6例肉芽肿性皮肤松弛症(GSS)的临床病理特点、诊断及治疗,提高对本病的认识。方法 回顾性分析近7年在我院诊治的6例GSS患者的临床和病理学资料。结果 6例患者均为男性,平均发病年龄29岁。所有病例均见松弛斑块甚至垂悬状肿块,5例发生于褶皱部位(或为主),1例仅发生于右胸部。其中1例合并蕈样肉芽肿。除1例合并瘙痒外,其他均无明显自觉症状。组织病理均可见真皮内非干酪性肉芽肿,伴中等大小的淋巴样细胞、多核巨细胞浸润。1例见淋巴样细胞异型性,余5例异型性不明显。1例伴有亲表皮现象。免疫组化均见CD4+T细胞为主的单克隆增生。4例行弹力纤维染色见弹力纤维卷曲、断裂甚至消失,2例见多核巨细胞吞噬弹力纤维现象。2例行TCR基因重排,均为γ单克隆增生。2例患者采用浅层X线照射或电子束照射,皮损变小后手术切除,未再复发。其余4例患者采用干扰素α-2b肌注、0.02%氮芥外用等,较前改善。结论GSS罕见,结合典型的临床、病理、免疫组化,一般可诊断。该病进展缓慢,不推荐过度治疗。局限于皱褶部位的GSS推荐手术切除治疗。
【关键词】：微小RNA 芯片 蕈样肉芽肿 逆转录聚合酶链反应 Myla细胞株 miR-378a-5p miR-107 miR-302c-3p SUFU IGF1R MAPK p38 Hedgehog 淋巴瘤 T细胞 皮肤 蕈样肉芽肿 皮肤表现 病理 治疗
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 英文缩略词5-6
• 全文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-17
• 参考文献14-17
• 第一部分 miRNA在早期蕈样肉芽肿发病机制中的相关性研究初探17-60
• 第一章 筛选与早期MF相关的miRNA17-33
• 引言18
• 材料与方法18-26
• 结果26-30
• 讨论30-31
• 参考文献31-33
• 第二章 生物信息学工具预测hsa-miR-378a-5p的靶基因及作用通路33-44
• 引言34
• 材料与方法34-37
• 结果37-41
• 讨论41-43
• 参考文献43-44
• 第三章 hsa-miR-378a-5p基因干扰对MF细胞株Myla的影响44-60
• 引言44-45
• 材料与方法45-52
• 结果52-57
• 讨论57-58
• 参考文献58-60
• 第二部分 6例肉芽肿性皮肤松弛症临床及病理分析60-69
• 引言61
• 一、 资料和方法61
• 二、结果61-67
• 讨论67-68
• 参考文献68-69
• 全文小结69-71
• 综述71-77
• 参考文献75-77
• 在读期间发表的文章及参加学术活动的情况77-79
• 致谢79-81

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本文编号：874528