吲哚胺2,3-双加氧酶2（IDO2）在小鼠黑色素瘤肺转移中的作用研究

发布时间：2017-09-24 23:32

  本文关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶2（IDO2）在小鼠黑色素瘤肺转移中的作用研究

  更多相关文章： 2 3-双加氧酶2(IDO2) 左旋-1-甲基色氨酸(L-1-MT) 黑色素瘤 肺转移

【摘要】：目的:检测IDO1、IDO2分别在正常小鼠和荷黑色素瘤小鼠组织中的表达;探讨吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO2)抑制剂左旋-1-甲基色氨酸(L-1-MT)对小鼠黑色素瘤肺转移的影响;体外实验观察L-1-MT和沉默肿瘤细胞中IDO2分别对细胞增殖、迁移、侵袭特性的影响。方法:1、C57BL/6雄鼠背部皮下接种黑色素瘤细胞B16-BL6 5×105个/只成瘤,不同时间处死小鼠并收集各脏器组织,用RT-PCR技术检测组织中IDO1和IDO2mRNA水平的表达;2、C57BL/6小鼠皮下接种黑色素瘤细胞B16-BL6成瘤后,再次静脉注射B16-BL6细胞建立小鼠黑色素瘤肺转移模型。应用IDO的化学抑制剂L-1-MT对荷瘤小鼠进行干预治疗,观察肺部成瘤情况并统计肺部成瘤结节数;3、分别应用IDO化学抑制剂L-1-MT及IDO2siRNA处理体外培养的黑色素瘤细胞B16-BL6。qPCR检测IDO2沉默效率,细胞划痕实验、transwell细胞迁移实验观察对肿瘤细胞迁移的影响;平板克隆形成实验检测肿瘤细胞的增殖情况;transwell细胞侵袭实验观察肿瘤细胞侵袭;结果:1、IDO1在正常小鼠和荷瘤小鼠的表达都在结肠和附睾,无明显差异,而IDO2除了在正常和荷瘤小鼠的肝脏、肾脏、大脑、小脑、附睾中均有表达外,在荷瘤小鼠的脾脏、肺、结肠、胸腺存在异常表达,在上述小鼠中均未发现转移。2、口服L-1-MT治疗可抑制C57BL/6小鼠皮下黑色素瘤的生长,同时使黑色素瘤肺转移模型小鼠肺部成瘤率减少。3、体外细胞实验:L-1-MT和沉默细胞中IDO2均能使B16-BL6细胞划痕迁移变慢、单克隆形成密度将低、transwell细胞迁移数减少、transwell细胞侵袭数减少。结论:1.荷黑色素瘤小鼠组织中异常表达的IDO2促进小鼠肿瘤肺转移。2.IDO2影响黑色素瘤细胞B16-BL6的增殖、迁移、和侵袭。
【关键词】：2 3-双加氧酶2(IDO2) 左旋-1-甲基色氨酸(L-1-MT) 黑色素瘤 肺转移
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.5
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩写一览表9-10
• 第1章 引言10-13
• 1.1 IDO与肿瘤免疫10-11
• 1.2 IDO2抑制剂 1-MT11-13
• 第2章 材料与方法13-24
• 2.1 实验动物、试剂与设备13-15
• 2.1.1 实验动物及细胞株13
• 2.1.2 主要的实验试剂13
• 2.1.3 主要的实验设备13-14
• 2.1.4 主要的试剂配制14-15
• 2.2 实验方法15-24
• 2.2.1 肿瘤细胞株B16-BL6的体外培养15
• 2.2.2 小鼠动物成瘤实验分组15
• 2.2.3 RT-PCR检测小鼠组织中IDO1、IDO2mRNA水平的表达15-18
• 2.2.4 构建黑色素瘤肺转移模型[31-33]及L1MT治疗18-19
• 2.2.5 转染IDO2SiRNA沉默B16-BL6肿瘤细胞中的IDO219-21
• 2.2.6 平板克隆形成实验21-22
• 2.2.7 划痕实验22
• 2.2.8 Transwell细胞迁移实验22
• 2.2.9 Transwell细胞侵袭实验22-23
• 2.2.10 统计学分析23-24
• 第3章 结果24-32
• 3.1 IDO1、IDO2 分别在正常小鼠和荷黑色素瘤小鼠组织中的表达24-25
• 3.2 动物实验小鼠的肿瘤生长情况25-27
• 3.2.1 L-1-MT 对小鼠皮下黑色素瘤的治疗效果25-26
• 3.2.2 L-1-MT 对小鼠黑色素瘤肺转移的治疗效果26-27
• 3.3 体外细胞实验观察L1MT和沉默细胞中IDO2分别对B16-BL6细胞生物学特性的影响27-32
• 3.3.1 RT-PCR检测B16-BL6细胞中IDO的表达及qPCR检测细胞中IDO2的沉默效果27
• 3.3.2 qPCR 检测 B16-BL6 细胞中 IDO2 的沉默效果27
• 3.3.3 B16-BL6 细胞平板克隆形成实验27-29
• 3.3.4 B16-BL6 细胞划痕实验29-30
• 3.3.5 B16-BL6细胞transwell侵袭实验30
• 3.3.6 B16-BL6 细胞 transwell 侵袭实验30-32
• 第4章 讨论32-35
• 第5章 结论35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-40
• 攻读学位期间的研究成果40-41
• 综述41-47
• 参考文献44-47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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本文编号：914098