免疫荧光技术在自身免疫性水疱病及先天性大疱性表皮松解症诊断中的应用

发布时间：2017-09-26 05:16

  本文关键词：免疫荧光技术在自身免疫性水疱病及先天性大疱性表皮松解症诊断中的应用

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【摘要】：免疫荧光是一种重要的荧光标记诊断技术,利用荧光素标记相应抗体,通过抗原抗体相互作用检测组织或血液中是否存在相应抗原或抗体,从而对其进行定位诊断。该方法在自身免疫性水疱病的诊断中占据着尤为重要的地位,近年来此方法也逐渐扩展至先天性大疱性表皮松解症的定位诊断中。本研究主要探讨免疫荧光技术在自身免疫性水疱病及先天性大疱性表皮松解症诊断中的应用。第1部分间接免疫荧光在自身免疫性表皮内水疱病诊断中的应用目的应用间接免疫荧光的方法,比较正常人皮肤、猴食管及盐裂正常人皮肤三种不同底物检测自身免疫性表皮内水疱病循环抗体的沉积情况及其敏感性和特异性差异。方法选取诊断明确天疱疮71例为病例组,对照组包括自身免疫性表皮下水疱病26例、慢性湿疹15例和正常对照15例,分别进行正常人皮肤、猴食管、盐裂正常人皮肤为底物的间接免疫荧光,观察荧光抗体的沉积情况,比较不同种类自身免疫性表皮内水疱病行不同底物间接免疫荧光的敏感性和特异性及其差异。结果天疱疮患者在以正常人皮肤、猴食管、盐裂正常人皮肤三种底物行间接免疫荧光中呈阳性者均可见到表皮棘细胞间荧光物质网状沉积。以正常人皮肤、猴食管、盐裂正常人皮肤为底物行间接免疫荧光对天疱疮诊断的敏感性分别为31.0%、83.1%、70.4%,特异性分别为96.4%、96.4%、94.6%。三种不同底物对天疱疮诊断敏感性进行比较,正常人皮肤间接免疫荧光与猴食管及盐裂间接免疫荧光间差异存在统计学意义(P0.001)；在Dsg1、Dsg3均阳性和仅Dsgl阳性天疱疮患者中,正常人皮肤间接免疫荧光与盐裂间接免疫荧光间差异存在统计学意义(P0.01)；三种不同底物行间接免疫荧光对天疱疮诊断的特异性间差异无统计学意义(P0.05)；仅Dsg3阳性天疱疮患者在以猴食管为底物时诊断敏感性明显高于仅Dsgl阳性天疱疮患者,且两者间差异有统计学意义(P0.05)；在仅Dsgl阳性天疱疮患者中对猴食管间接免疫荧光阴性与阳性患者抗Dsg1 ELISA指数水平进行比较,两者抗体水平无显著性差异(P0.05),对盐裂间接免疫荧光阴性与阳性两组患者其抗Dsg1 ELISA指数水平进行比较两者同样无显著性差异(P0.05)。结论对于天疱疮,猴食管和盐裂正常人皮肤为底物间接免疫荧光敏感性均高于以正常人皮肤为底物间接免疫荧光,而猴食管与盐裂正常人皮肤间接免疫荧光间敏感性无显著性差异,因此,在猴食管不易取得时,可使用盐裂间接免疫荧光替代正常人皮肤间接免疫荧光。且猴食管为底物间接免疫荧光对于存在Dsg3抗体的患者敏感性高于仅有Dsgl抗体的患者。猴食管、盐裂正常人皮肤间接免疫荧光的结果与Dsgl ELISA指数水平无关。第2部分 间接免疫荧光在自身免疫性表皮下水疱病诊断中的应用目的 应用间接免疫荧光的方法,比较正常人皮肤、猴食管及盐裂正常人皮肤三种不同底物检测自身免疫性表皮下水疱病循环抗体的沉积情况及其敏感性和特异性差异。方法选取自身免疫性表皮下水疱病26例为病例组,对照组包括天疱疮71例,慢性湿疹15例及正常对照15例,分别进行正常人皮肤、猴食管、盐裂正常人皮肤为底物的间接免疫荧光,观察荧光抗体的沉积情况,比较不同种类自身免疫性表皮下水疱病行不同底物间接免疫荧光的敏感性和特异性及其差异。结果大疱性类天疱疮患者在以正常人皮肤、猴食管、盐裂正常人皮肤三种底物行间接免疫荧光中呈阳性者均可见到荧光物质沿基底膜带呈线性沉积,盐裂正常人皮肤间接免疫荧光可见大疱性类天疱疮患者荧光物质线性沉积于表皮侧,而获得性大疱性表皮松解症和P200类天疱疮患者线性沉积于真皮侧。三种底物(正常人皮肤、猴食管、盐裂正常人皮肤)在自身免疫性表皮下水疱病诊断中的敏感性分别为42.3%、69.2%、96.1%,特异性分别为98%、100%、97%,其中在大疱性类天疱疮患者中诊断的敏感性分别为40.0%、75.0%、90.0%；三种不同底物对于表皮下水疱病诊断的敏感性比较,正常人皮肤间接免疫荧光与盐裂间接免疫荧光间差异均存在统计学意义(P0.001),猴食管间接免疫荧光与盐裂间接免疫荧光间差异均存在统计学意义(P0.05)；三者特异性间均无显著性差异(P0.05)。在大疱性类天疱疮中三种不同底物诊断的敏感性比较,正常人皮肤间接免疫荧光与盐裂间接免疫荧光间差异存在统计学意义(P0.01)。猴食管间接免疫荧光阴性与阳性两组大疱性类天疱疮患者抗BP180 ELISA指数相比两者抗体水平无显著性差异(P0.05)。结论盐裂正常人皮肤间接免疫荧光对于自身免疫性表皮下水疱病的诊断优于以猴食管和正常人皮肤为底物的间接免疫荧光。猴食管间接免疫荧光的结果与BP180 ELISA指数水平无关。第3部分盐裂间接免疫荧光在自身免疫性表皮下水疱病诊断中的应用目的使用盐裂间接免疫荧光的方法协助诊断3例特殊自身免疫性表皮下水疱病。方法运用盐裂间接免疫荧光的方法筛出特殊自身免疫性表皮下水疱病,使用酶联免疫吸附试验及免疫印迹的方法辅助明确诊断。结果明确诊断1例大疱性类天疱疮,1例获得性大疱性表皮松解症及1例P200类天疱疮。结论盐裂间接免疫荧光表皮侧线状沉积提示为大疱性类天疱疮；盐裂间接免疫荧光真皮侧线状沉积需进一步完善ELISA及免疫印迹明确循环中相关抗体从而确定诊断。第4部分免疫荧光在先天性大疱性表皮松解症分型诊断中的应用目的通过对先天性大疱性表皮松解症患者皮损进行不同抗体的荧光及免疫组化标记,对其进行分型诊断。方法收集2015年1月-6月中国医学科学院皮肤病医院门诊先天性大疱性表皮松解症患者5例,取其新发水疱处皮损分别制成冰冻切片及石蜡切片,分别使用免疫荧光和免疫组化的方法对其进行角蛋白K14、Ⅳ型胶原、Ⅶ型胶原标记,同时使用正常人皮肤及盐裂正常人皮肤作对比,使用显微镜观察患者皮损处相应抗体标记部位,根据标记部位不同进行结果的判断。结果单纯型大疱性表皮松解症患者角蛋白K14标记于水疱中或顶部,Ⅳ型胶原标记水疱底部；盐裂正常人皮肤角蛋白K14标记于裂隙顶部,Ⅳ型胶原与Ⅶ型胶原标记裂隙底部；营养不良型大疱性表皮松解症患者角蛋白K14及Ⅳ型胶原标记水疱顶部,Ⅶ型胶原较对照明显减弱或消失。结论免疫荧光是先天性大疱性表皮松解症患者分型诊断的重要方法,且免疫荧光分型诊断优于免疫组化。
【关键词】：免疫荧光 自身免疫性水疱病 先天性大疱性表皮松解症 诊断
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.59;R446.6
【目录】：

• 缩略词6-7
• 全文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 研究背景及研究目的14
• 本课题拟解决的关键问题14-15
• 第1部分 间接免疫荧光在自身免疫性表皮内水疱病诊断中的应用15-27
• 1.1 引言15
• 1.2 材料和方法15-19
• 1.3 实验结果19-24
• 1.4 讨论24-25
• 1.5 参考文献25-27
• 第2部分 间接免疫荧光在自身免疫性表皮下水疱病诊断中的应用27-36
• 2.1 引言27
• 2.2 材料和方法27-29
• 2.3 实验结果29-34
• 2.4 讨论34
• 2.5 参考文献34-36
• 第3部分 盐裂间接免疫荧光在自身免疫性表皮下水疱病诊断中的应用36-46
• 3.1 引言36
• 3.2 临床病例资料36-37
• 3.3 材料和方法37-41
• 3.4 实验结果41-44
• 3.5 讨论44-45
• 3.6 参考文献45-46
• 第4部分 免疫荧光在先天性大疱性表皮松解症分型诊断中的应用46-55
• 4.1 引言46
• 4.2 材料和方法46-48
• 4.3 实验结果48-52
• 4.4 讨论52-53
• 4.5 参考文献53-55
• 全文小结55-56
• 附56-77
• 附1 论文相关综述56-64
• 附2 在读期间发表文章64-74
• 附3 在读期间参加学术会议及学习班74-75
• 附4 在读期间获奖情况75-76
• 附5 在读期间参加学生工作及志愿活动76-77
• 致谢77-79

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本文编号：921679