用腺病毒载体介导的基因转移研究HBV/C区热点变异对小鼠免疫应答的影响

发布时间：2023-03-28 19:36

　　国内外的研究发现HBV／C区变异与病变重度相关，但两者之间的因果关系尚未确定。本研究以重组腺病毒为载体，将含有变异位点的HBV基因组转入HepG2细胞和BALB／C小鼠，从体内和体外研究变异位点的生物学意义，旨在阐明C区变异对宿主细胞免疫和体液免疫的影响。 1．重组腺病毒的构建 用定点诱变技术，以含有1.2拷贝HBV基因组的p3.8Ⅱ质粒为模板，构建含L60V和I97L的突变株。采用AdEasy系统构建重组腺病毒，以分子克隆手段将HBV基因组克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack上，重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转化大肠杆菌BJ5183细胞，通过同源重组获得重组腺病毒质粒，用Pac Ⅰ线性化后，转染293包装细胞，获得含野生型和变异型HBV基因的3种重组腺病毒。 2．重组腺病毒生物学特征的鉴定 电镜下观察到了重组腺病毒具有典型的腺病毒形态，直径约70nm。用PCR和Southern blot证实HBV DNA已整合入腺病毒基因组，有遗传稳定性：用RT-PCR检出HBV特异的mRNA，用ELISA在感染了重组腺病毒的293细胞的培养上清中检出了HBeAg。 ...

【文章页数】：41 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 重组腺病毒的构建
    材料和方法
    结果
    讨论
第二部分 重组腺病毒的生物学特性
    材料和方法
    结果
    讨论
第三部分 重组腺病毒诱发小鼠免疫应答
    材料和方法
    结果
    讨论
全文总结
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参考文献
致谢



本文编号：3773150