铜绿假单胞菌致病因子抑制剂及喹诺酮信号分子介导的调节途径研究

发布时间：2023-04-03 23:13

　　抗生素的使用使细菌感染类疾病得到了有效的控制,但随着耐药菌株的出现限制了人们治疗细菌感染性疾病的能力,感染性疾病再次对人类健康造成严重的威胁。铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)是一种条件致病菌,是医院获得性感染的三大致病菌之一。它能引起各种不同的急性或慢性感染,特别是对于免疫功能缺陷或是患有慢性疾病的人群。抗生素的长期使用及滥用使铜绿假单胞菌对许多抗生素产生了严重的耐药性,这导致铜绿假单胞菌感染类疾病在临床治疗中面临了极大的困难。 细菌的致病力取决于细菌所产生的致病因子(或毒性因子)及其对宿主的损伤作用。致病菌通过释放毒性因子来破坏宿主细胞的正常生理功能,甚至导致宿主细胞的死亡。因此,通过抑制细菌感染宿主过程中所依赖的毒性因子,将可以抑制细菌的致病性,达到控制感染的目的。因此,对细菌致病途径及机理的研究,并在此基础上研发抗细菌致病性药物,已成为病原微生物和抗生素研究领域的一个全新的重要方向。 中药在我国具有数千年的历史,其防治感染性疾病的能力被人们所熟知。本课题以中药中“清热解毒”类药材为筛选对象,利用荧光素酶(Luciferase)基因luxCDAB...

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
目录
第一章 绪论
    1.1 铜绿假单胞菌
        1.1.1 铜绿假单胞菌的致病机理
        1.1.2 铜绿假单胞茵Ⅲ型分泌系统
        1.1.3 铜绿假单胞菌生物被膜
        1.1.4 铜绿假单胞菌运动性
        1.1.5 铜绿假单胞菌的耐药机制
        1.1.6 铜绿假单胞菌群体感应系统及致病性
        1.1.7 铜绿假单胞菌喹诺酮类信号分子
    1.2 抗感染中药
    1.3 研究目的和意义
第二章 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株及质粒
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 培养基及培养条件
        2.1.4 实验试剂及配置
        2.1.5 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 中药粗提物的制备
        2.2.2 层培养基扩散法及半固体混药法检测基因表达
        2.2.3 基因表达液体检测法(酶标检测仪)
        2.2.4 细菌运动性检测
        2.2.5 生物被膜(biofilm)的测定
        2.2.6 弹性蛋白酶检测
        2.2.7 浓硫酸-地衣酚法测定鼠李糖脂含量及活性
        2.2.8 细胞毒性检测
        2.2.9 果蝇感染模型
        2.2.10 铜绿假单胞菌藻酸盐包埋颗粒的制备
        2.2.11 大鼠肺部感染操作步骤
        2.2.12 感染大鼠给药分组
        2.2.13 肉眼观测大鼠肺部感染分级
        2.2.14 大鼠肺病理切片制作
        2.2.15 大鼠血清样本的采集和制备(ELISA法检测大鼠血清中TNF-α浓度)
        2.2.16 大鼠肺组织中活菌计数
        2.2.17 双亲株杂交将启动子.报道子序列整合于染色体
        2.2.18 PQS提取及薄层层析检测
        2.2.19 薄层层析所分离物质的刮板及浓缩
        2.2.20 高效液相(HPLC)分析
        2.2.21 质谱分析
第三章 实验结果
    3.1 20 种中药粗提物对铜绿假单胞菌毒性因子表达的影响
        3.1.1 中药粗提库的构建
        3.1.2 中药对铜绿假单胞菌毒性因子表达的影响
    3.2 艾叶对铜绿假单胞菌毒性因子表达的影响
        3.2.1 艾叶水提物抑制铜绿假单胞菌毒性因子的表达
        3.2.2 艾叶水提物抑制铜绿假单胞菌的丛动能力
    3.3 黄芩粗提物对铜绿假单胞菌毒性因子表达的影响
        3.3.1 黄芩粗提物对铜绿假单胞菌毒性因子表达的影响
        3.3.2 黄芩粗提物抑制铜绿假单胞菌丛动能力
    3.4 黄芩有效成分黄芩苷对铜绿假单胞致病性的抑制
        3.4.1 黄芩苷对铜绿假单胞菌毒性因子表达的影响
        3.4.2 黄芩苷明显抑制细菌铜绿假单胞菌丛动能力
        3.4.3 黄芩苷抑制弹性蛋白酶以及鼠李糖脂的合成
        3.4.4 黄芩苷削弱铜绿假单胞菌对真核细胞的细胞毒性
        3.4.5 果蝇感染模型中黄芩苷对铜绿假单胞菌致病性的抑制
        3.4.6 大鼠肺部感染模型中黄芩苷对铜绿假单胞菌致病性的抑制
    3.5 黄芩苷抑制铜绿假单胞菌致病性的作用机制研究
        3.5.1 GacA途径与黄芩苷的作用
        3.5.2 Rh1R/I-C4-HSL系统与黄芩苷的作用
        3.5.3 黄芩苷以PQS系统为靶点来抑制Ⅲ型分泌系统的表达
        3.5.4 黄芩苷对铜绿假单胞菌丛动能力的抑制作用与调控蛋白PqsR无关
        3.5.5 黄芩苷对PQS系统信号分子产生的影响
        3.5.6 未知物质的提取分离及鉴定
    3.6 铜绿假单胞菌PQS群体感应调节系统对致病因子调节途径的研究
        3.6.1 PQS可抑制细菌丛动能力,此抑制作用不依赖于调控蛋白PqsR的存在
        3.6.2 PAO1蹭行运动需要调控蛋白PqsR的存在；PQS信号分子及调控蛋白PqsR对PAO1的泳动能力没有影响
        3.6.3 外加PQS对影响铜绿假单胞菌运动相关基因的影响
        3.6.4 PQS对铜绿假单胞菌生物被膜的促进作用不依赖于Las和Rhl系统
        3.6.5 PQS对铜绿假单胞菌生物被膜的促进作用依赖于RetS/GacAS/Rsm系统
第四章 讨论
    4.1 中药中抗致病性成分的筛选
    4.2 黄芩苷抗致病因子的作用机制研究
    4.3 黄芩苷抑制铜绿假单胞菌丛动能力的研究
    4.4 PQS信号分子及调控蛋白PqsR对铜绿假单胞菌运动性的影响
    4.5 铜绿假单胞菌信号分子PQS促进生物被膜形成的机制研究
    4.6 小结
参考文献
攻读博士学位期间取得的研究成果
致谢
作者简介



本文编号：3781328