细胞因子影响鼠卵透明带3 DNA疫苗免疫不育效果的研究

发布时间：2024-02-23 17:58

　　哺乳动物受精过程中,卵子表面的透明带3(ZP3)蛋白作为精子初级受体,参与精子与卵子的结合并诱发顶体反应。ZP3特异性抗体能够与天然的ZP3结合从而阻断精卵结合导致不育。利用ZP3作为抗原制备的疫苗来诱导免疫不育是人类理想的避孕手段,也是控制动物生育的人道之选。长期以来,人们尝试利用不同类型的不育疫苗、发送途径及免疫佐剂增强ZP3疫苗的免疫反应,以开发出高效的避孕疫苗。DNA疫苗是一种安全、廉价、易于生产及保存的疫苗类型,在病毒性疾病的预防和控制方面得到了广泛的应用。本实验室前期的研究结果表明,肌肉注射和滴鼻免疫鼠ZP3 (mZP3) DNA疫苗均能导致小鼠不育,但DNA疫苗激发的体液免疫反应较弱,需要通过添加免疫佐剂来增强免疫不育的效果。增强树突状细胞(dendritic cells, DCs)对DNA疫苗的递呈效率,是提高DNA疫苗免疫原性的关键。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)能够促进包括DCs在内的抗原递呈细胞(antigen presenting cells, APC...

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图３?ＧＭ－ＣＳＦ和ＦＩｔ３Ｌ对ＤＣ免疫原性相互影响的分子解释??通过激活ＳＴＡＴ３，?Ｆ怕Ｌ促进了?１ＤＯ的表达抑制了?ＮＦ－ｋＢ和ＭＨＣ－ＩＩ的表达，因此抑制了?ＤＣ的??免疫原性

ＧＭ－ＣＳＦ诱导的信号通路起始于ＪＡＫ２，通过激活ＳＴＡＴ５间接活化ＮＦ－ｋＢ或直接活??化ＮＦ－ｋＢ来促进ＤＣｓ发育，尤其促进迁移性ＤＣｓ的发育及致免疫活性，增强机体的固??有免疫应答。该核也信号通路中ＳＴＡＴ５和ＮＦ－ｋＢ是关键的信号分子（图３）?Ｗ。??ＳＴＡＴ５能够促进人....

图２重组质粒在小鼠巧脏内的瞬时表达??高压水动力转染化后提取赃脏ｍＲＮＡ反转录，并Ｗ?ｃＤＮＡ及未经反转录的ＲＮＡ作为对照，??

出４０４ｂｐ的目的条带，而其它阴性对照或经ＰＣＤＮＡ３．０转染后的肝脏ｃＤＮＡ均没有出现??目的条带。该结果表明，ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ质粒能够在真核细胞中表达，可Ｗ用于后期的免??疫接种实验（图２）。??ｉＨＩ??图２重组质粒在小鼠巧脏内的瞬时表达??高压水动力转染化后提取赃脏ｍ....

图３?ｐｃＤ－ｍＺＰ３质粒双酶切结果??携带ｐｃＤ－ｍＺＰ３的菌液涂布ＬＢ板后挑取单克隆经ＥｃｏＲＩ和Ｘｂａｌ双酶切鉴定：１，ｐｃＤ－ｍＺＰ３质??

用于免疫的ｍＺＰ３ＤＮＡ疫苗（ｐｃＤ－ｍＺＰ３）质粒由本实验室前期构建并保存ｔＷ。将??携带ｐｃＤ－ｍＺＰ３质粒的大肠杆菌复苏并大量扩増后用碱裂解法提取质粒ＤＮＡ，并用双??酶切鉴定，经１％琼脂糖电泳检测可见１２００ｂｐ左右目的条带（图３）。??３３??

图５?ｐｃＤ－?ＧＭ－ＣＳＦ促进脾脏ＡＰＣｓ成熟??ＲＴ－ＰＣ民检测共刺激因子ＣＤ８０，ＣＤ８３ＣＤ８６在赃脏中的表达

激因子ＣＤ８０，?ＣＤ８３，?ＣＤ％的表达情况。与未注射ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ组相比，ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ??提前４ｄ处理或与ｐｃＤ－ｍＺＰ３同时注射均能促进脾脏组织中ＣＤ８０，?ＣＤ８３和ＣＤ８６分子??的上调表达。而ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ＋ｐｃＤ－ｍＺＰ３注射组共刺激因子的表达水....

本文编号：3907745