DNA甲基化转移酶Dnmt3a促进Ⅰ型干扰素天然免疫应答及其机制研究

发布时间：2024-03-05 20:43

　　第一部分Dnmt3a通过影响IRF3磷酸化促进TLR和RIG-Ⅰ诱导的Ⅰ型干扰素的产生巨噬细胞作为天然免疫的重要组成部分发挥着重要的免疫防御功能。在巨噬细胞发育、分化的不同阶段,转录因子和靶基因表达谱和表达水平均发生着改变。那么在此过程中,表观调控机制究竟起到了什么样的作用呢?Dnmt3a作为DNA甲基化转移酶,它可以对基因组中的CpG岛中的C进行从头甲基化。在胚胎发育的不同阶段、细胞的不同分化阶段及不同组织的肿瘤细胞中,Dnmt3a则可以选择性的引起不同靶基因甲基化状态的改变,从而发挥对靶基因的表观调控。为了探讨Dnmt3a在腹腔巨噬细胞中的作用,我们首先在腹腔巨噬细胞中利用RNA干扰技术下调内源性Dnmt3a的表达,通过RT-qPCR和ELISA的方法检测腹腔巨噬细胞产生细胞因子的mRNA和蛋白水平,发现在腹腔巨噬细胞中干扰Dnmt3a可以选择性地抑制TLR和RIG-Ⅰ诱导的Ⅰ型干扰素的产生。我们获得了巨噬细胞Dnmt3a条件性敲除小鼠,通过细胞计数和FACS的方法对Dnmt3a条件性敲除小鼠来源的腹腔巨噬细胞进行了表型分析,发现Dnmt3a条件性敲除小鼠来源的腹腔巨噬细胞数目及表...

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
序言
中文摘要
Abstract
缩略词表
第一部分 Dnmt3a通过影响IRF3磷酸化促进TLR和RIG-Ⅰ诱导的Ⅰ型干扰素的产生
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3 实验结果
        3.1 Dnmt3a的组织、细胞表达水平检测分析
        3.2 干扰Dnmt3a的表达能够抑制Ⅰ型干扰素的产生
        3.3 巨噬细胞中条件性敲除Dnmt3a小鼠的鉴定
        3.4 巨噬细胞中条件性敲除Dnmt3a能够下调Ⅰ型干扰素的产生
        3.5 沉默Dnmt3a的表达抑制巨噬细胞IRF3磷酸化
        3.6 Dnmt3a条件性敲除小鼠抗病毒感染能力减弱
    4 讨论
    5 结论
第二部分 Dnmt3a通过HDAC9介导的TBK1去乙酰化以促进Ⅰ型干扰素的产生
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3 实验结果
        3.1 干扰Dnmt3a的表达能够抑制巨噬细胞HDAC9的表达
        3.2 HDAC9主要定位于细胞胞浆
        3.3 干扰HDAC9的表达能够抑制Ⅰ型干扰素的产生和IRF3磷酸化
        3.4 HDAC9可以与TBK1相互作用
        3.5 TBK1存在乙酰化修饰
        3.6 HDAC9可以调控TBK1的激酶活性
        3.7 TBK1乙酰化位点的确认
    4 讨论
    5 结论
第三部分 Dnmt3a通过影响HDAC9远端启动子区H3K27me3水平以调控HDAC9的表达
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
    3 实验结果
        3.1 巨噬细胞中条件性敲除Dnmt3a抑制HDAC9远端启动子区DNA甲基化水平
        3.2 Dnmt3a能够抑制HDAC9远端启动子区H3K27me3水平
    4 讨论
    5 结论
总结
参考文献
综述 DNA甲基化转移酶及其功能的研究进展
    参考文献
作者简历



本文编号：3920016