PLGA的不同组成对支架材料性能的影响研究

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赵莉等：ＰＬＧＡ的不同组成对支架材料性能的影响研究

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１．５降解实验

别取材，做Ｍ１’ｒ增殖实验，方法同上。该实验每个时间将样品裁成３ｃｍ×１．５ｃｍ的尺寸，浸泡于ｐＨ＝７．２点设４个平行对照孔。结果表示为平均值４－标准差，的磷酸盐缓冲溶液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ

ｂｕｆｆｅｒｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）

显著性差异通过学生氏ｔ检验进行判断，以Ｐ＜０．０５为

中，然后置于真空干燥箱中反复抽真空，使样品充分润有统计学意义。

湿。将完全浸润的样品放置于六孔培养板内，加入定１．６．３

总胶原含量总胶原含量是通过测定羟脯氨

量ＰＢＳ溶液，放入３７℃恒温箱内。于实验后０，１，２，３，酸的含量来间接测定的。羟脯氨酸在胶原蛋白中占４，６，８，１０周取样，去离子水冲洗，冷冻干燥后进行重量１３．４％，在弹性蛋白中占极少量，其它蛋白中均不存损失、拉伸强度及ＳＥＭ检测。

在，因此羟脯氨酸的量能反映结缔组织疾病的胶原代

重量损失通过公式Ｌ＝（Ｗｏ－Ｗ。）／ｗｏ

Ｘ

１００％来计

谢情况。采用南京建成生物工程研究所的羟脯氨酸算，其中ｗｏ是降解前质量，ｗ。是降解不同时间后的质

（Ｈｙｐ）测试盒（Ａ０３０）来测定，其原理是样品在氯化亚量。

锡的盐酸溶液中水解，释放出羟脯氨酸。羟脯氨酸在１．６细胞实验

氧化剂的作用下产生的氧化物与对二甲氨基苯甲醛反原代培养的人真皮成纤维细胞体外传代培养至５应生成紫红色化合物，根据其呈色的深浅可推算出其—１０代，待细胞铺满培养皿底部时，，用０．２５％胰酶消化含量。

成２×１０６个／ｍｌ细胞悬液，按２

Ｘ

１０４／ｌ、／ｃｍ２的密度接

细胞一材料复合物处理前，进行组织称重，研磨后种于灭菌处理好的材料表面，待细胞黏附２ｈ后，加入于生理盐水中匀浆，３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清，稀足量的ＤＭＥＭ＋１０％小牛血清（ＦＢＳ）细胞培养液培养，释后检测液。按照试剂盒说明书方法消化，并设立标隔天换液。

准管及空白管。混匀，６０℃水浴１５ｍｉｎ，冷却后，３５００ｒ／１．６．１

细胞粘附样品剪裁成ｌｃｍ×Ｉｃｍ的尺寸，经

ｒａｉｎ离心ｌＯｍｉｎ，取上清液在５５０ｎｍ处，测各管吸光度。７５％的酒精浸泡，培养液浸润后用于细胞接种。细胞接根据公式计算羟脯氨酸的含量。

种材料２Ａｈ后，每孔加入１００山５ｍｓ／ｍ１噻唑蓝（３－（４，５一

１．６．４扫描电镜（ｓｃａｎｎｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＳＥＭ）

ｄｉｍｃｔｈｙｌｔｈｉｏａｚｏｌ－２－ｙ１）－２，５一ｄｉｐｈｅｎｙｌ—ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，

观察细胞一材料复合物培养３，７天后，用ＰＢＳ洗去ＭＹｒ）溶液，３７℃恒温培养箱反应４ｈ，将复合物移至新的残余培养液，放入２．５％戊二醛溶液固定，锇酸后固定，２４孔板，二甲基亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｆｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）溶出材梯度乙醇脱水后，ｌ临界点干燥，离子溅射仪喷金镀膜

料上的细胞内的结晶紫，在ＤＩＡｒｅａｄｅｒ（Ｅｌｘ

８００Ｇ，

后，在ＨｉｔａｃｈｉＳ－４５０扫描电镜上观察细胞的粘附和增

ＤＩＡＬＡＢ

ＧＭＢＨ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）上，以４９０ｈｍ波长测溶

殖情况。

出物吸光值。用已知浓度（０．２５

Ｘ

１０４

４＂／ｌＩｌｌ，０．５

Ｘ

１０４

４＂／ｍｌ，４×１０４ⅣｌＩｌｌ）培养

２

结果

爪／ｍｌ，１Ｘ１０４个／Ｉ【１１，２×１０４

２４ｈ的单层细胞测吸光值，得到细胞数．１吸光值标准曲线。通过溶液浇注／颗粒沥滤法制备出的ＰＬＧＡ支架，依据标准曲线求出细胞在材料上的黏附率。该实验重复孑Ｌ结构均匀，孔径在４０—２００１ＬＬｍ之间，连通孔径较小，３次，每次实验设４个平行对照孑Ｌ。

约在１０—４０１山ｍ之间。三种比例的ＰＬＧＡ支架在孑Ｌ结１．６．２细胞增殖在细胞接种材料后的１，３，５，７天分

构上没有差异（图１）。

图１三种不同比例的ＰＬＧＡ多孔支架的ＳＥＭ照片

Ｆｉｇ．１

ＳＥＭｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓ

ｏｆｐｏｒｏｕｓＰＬＧＡｓｃａｆｆｏｌｄｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｉｔｉａｌｃｏｐｏｌｙｍｅｒ

ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ

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