氯化镧在磨损颗粒诱导无菌性炎症中作用的体内外实验研究

发布时间：2017-04-06 19:26

  本文关键词：氯化镧在磨损颗粒诱导无菌性炎症中作用的体内外实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过体内外实验观察不同浓度和剂量的氯化镧对人工关节磨损颗粒刺激无菌性炎症反应的作用效果，为进一步观察氯化镧对磨损颗粒导致炎性骨溶解的作用效果及进一步研究其作用机制提供理论依据。 方法：采用真空球磨法体外制备人工关节磨损颗粒。体外实验中，RAW264.7细胞被随机分成8组：空白对照组、磨损颗粒组、磨损颗粒+氯化镧组(2.5μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)和氯化镧组(2.5μmol/L、10μmol/L和100μmol/L)；分组处理48h后采用CCK-8、流式细胞术分别进行细胞活性和凋亡检测，并用ELISA、RT-PCR和western blot检测TNF-α、IL-1β和NF-κB基因及蛋白的表达水平。体内实验中，采用45只雄性BALB/c小鼠建立气囊模型，，并随机分为空白对照组、磨损颗粒组和磨损颗粒+氯化镧组(0.1μmol、0.9μmol和8.1μmol)；分组处理后第7天处死小鼠并收集囊壁组织，通过HE染色观察囊壁组织中炎症反应情况，并采用ELISA、RT-PCR和western blot在基因及蛋白水平检测囊壁组织中TNF-α、IL-1β和NF-κ B的表达变化。 结果：分组处理期间，三种浓度和剂量的氯化镧均未影响RAW264.7细胞的活性和小鼠的存活。磨损颗粒在体内外实验中均可有效刺激无菌性炎症的产生。体外实验结果显示2.5和10μmol/L氯化镧可显著抑制TNF-α、IL-1β以及NF-κB的表达（P0.05），但100μmol/L氯化镧未见明显的炎症抑制作用，甚至促进炎症的产生。体内实验结果显示0.9μmol氯化镧能抑制小鼠气囊模型中磨损颗粒诱导的促炎症因子及NF-κ B基因和蛋白的表达（P0.05）；0.1μmol和8.1μmol氯化镧未见明显炎症抑制效果，8.1μmol氯化镧甚至产生不良反应。 结论：本实验中氯化镧未对RAW264.7细胞和BALB/c小鼠产生毒性作用；一定浓度和剂量的氯化镧可抑制体内外磨损颗粒刺激产生的无菌性炎症，其作用机制可能与抑制NF-κB活化有关；氯化镧的抑制效果成浓度和剂量相关性，过高浓度和剂量的氯化镧不但不能产生抑制无菌性炎症的作用，甚至有促进炎症产生和发生其他不良反应的趋势。
【关键词】：氯化镧 磨损颗粒 无菌性炎症 促炎症因子 NF-κB RAW264.7细胞 小鼠气囊模型
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 材料与方法11-24
• 2.1 材料11-13
• 2.1.1 RAW264.7 细胞株和 BALB/c 小鼠来源11
• 2.1.2 主要仪器与设备11-12
• 2.1.3 主要试剂12-13
• 2.2 方法13-23
• 2.2.1 实验材料灭菌和去热原13
• 2.2.2 磨损颗粒的制备与分析13-14
• 2.2.3 体外 RAW264.7 细胞的培养和分组14
• 2.2.4 体内小鼠气囊（air-pouch）模型建立及分组14-15
• 2.2.5 细胞 CCK-8 实验15-16
• 2.2.6 ANNEXIN V-FITC/PI 流式细胞凋亡检测16
• 2.2.7 小鼠大体观察及组织 HE 染色16-17
• 2.2.8 ELISA 法检测细胞和组织中 TNF-α、IL-1β的释放17-18
• 2.2.9 RT-PCR 检测细胞和组织中 TNF-α、IL-1β和 NFATc1 基因的表达18-21
• 2.2.10 Western blot 检测细胞和组织中 NF-κB/p65 的表达21-23
• 2.3 统计学分析23-24
• 第3章 结果24-39
• 3.1 体外实验24-31
• 3.1.1 氯化镧对磨损颗粒干预的 RAW264.7 细胞增殖和凋亡的影响24-27
• 3.1.2 氯化镧对磨损颗粒刺激的 RAW264.7 细胞内 TNF-α、IL-1β和NFATc1 mRNA 表达的影响27-29
• 3.1.3 氯化镧对磨损颗粒刺激的 RAW264.7 细胞释放和表达 TNF-α、IL-1β和 NF-κB/p65 蛋白的影响29-31
• 3.2 体内实验31-39
• 3.2.1 氯化镧对磨损颗粒刺激小鼠气囊模型的影响31-34
• 3.2.2 氯化镧在小鼠气囊模型中对磨损颗粒刺激的 TNF-α、IL-1β和 NFATc1 mRNA 表达的影响34-36
• 3.2.3 氯化镧在小鼠气囊模型中对磨损颗粒刺激的 TNF-α、IL-1β释放和NF-κB/p65 表达的影响36-39
• 第4章 讨论39-45
• 4.1 磨损颗粒诱导的无菌性炎症与假体松动39-40
• 4.2 镧元素对 RAW264.7 细胞活性和对 BALB/c 小鼠生存的影响40-41
• 4.3 氯化镧对磨损颗粒诱导 TNF-α和 IL-1β表达和释放的影响41
• 4.4 氯化镧对磨损颗粒激活 NF-κB 的影响41-42
• 4.5 氯化镧在磨损颗粒诱导无菌性炎症中的作用特点42-43
• 4.6 展望与小结43-45
• 第5章 结论45-46
• 致谢46-47
• 参考文献47-53
• 攻读学位期间的研究成果53-54
• 综述54-63
• 参考文献61-63

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本文编号：289538