功能性多肽自组装纳米纤维水凝胶诱导骨髓间充质干细胞向神经元分化研究

发布时间：2023-08-30 00:46

　　目的:设计一种含IKVAV/RGD功能性多肽自组装水凝胶与骨髓间充质干细胞共培养,观察细胞生长状态、细胞相容性、细胞粘附性能及向神经元细胞分化情况。方法:1.取3-4周龄SD(Sprague Dawley)大鼠采用全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs(骨髓间充质干细胞)并用流式细胞术鉴定BMSCs表面抗原。2.设计含IKVAV(I-异亮氨酸,K-赖氨酸,V-缬氨酸,A-丙氨酸,V-缬氨酸)/RGD(R-精氨酸,G-甘氨酸,D-天冬氨酸)多肽用固相自动多肽合成仪(Solid-phase peptid synthesis,SPPS)合成,采用HPLC(高效液相色谱)纯化并检测其纯度,质谱(MS)仪检测其平均分子量。配制成1wt%含IKVAV/RGD两亲性多肽溶液用等剂量DMEM触发自组装水凝胶形成,并用透射电镜显微(TEM)观察自组装水凝胶内部结构。3.CCK-8试剂盒检测不同浓度的含IKVAV-RGD自组装水凝胶与BMSCs共培养细胞增殖/毒性实验;死活细胞染色检测试剂Calcein-AM/PI分别检测含IKVAV-RGD自组装多肽水凝胶与BMSCs共培养(三维体系培养)、骨髓间充质干细胞接...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料及方法
    2.1 主要材料和试剂
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 细胞
        2.1.3 多肽合成
        2.1.4 主要试剂及产地
        2.1.5 主要实验设备及产地
        2.1.6 主要溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 原代BMSCs的分离及培养
        2.2.2 原代BMSCs的传代
        2.2.3 BMSCs的鉴定
        2.2.4 两亲性多肽设计、合成及表征
        2.2.5 两亲性多肽自组装水凝胶与BMSCs共培养
    2.3 统计学分析
第3章 实验结果及分析
    3.1 BMSCs培养及传代
    3.2 流式细胞仪检测BMSCs表面标记抗原CD34、CD45 CD90、CD105 的表达
    3.3 两亲性多肽设计及合成的检测
    3.4 含IKVAV/RGD两亲性多肽触发自组装水凝胶
    3.5 BMSCs在含IKVAV/RGD两亲性多肽自组装水凝胶表面生长情况
    3.6 透射电镜下表征含IKVAV/RGD两亲性多肽自组装水凝胶
    3.7 含IKVAV-RGD自组装水凝胶对BMSCs细胞增殖与毒性实验
    3.8 含IKVAV-RGD多肽自组装水凝胶对BMSCs死活细胞染色实验
    3.9 IKVAV-RGD多肽自组装水凝胶对BMSCs粘附性能实验
    3.10 实时荧光定量PCR检测mRNA表达水平
    3.11 细胞免疫荧光检测结果
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3844605