模拟皮肤发育构建含附件组织工程皮肤的初步研究

发布时间：2017-05-21 21:04

  本文关键词：模拟皮肤发育构建含附件组织工程皮肤的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：应用刀片刮取法及酶消化法获取胎鼠和小鼠表皮细胞和成纤维细胞，对获得的表皮细胞和成纤维细胞进行培养、鉴定，并应用获得的表皮细胞作为种子细胞，PGA作为支架，初步构建含附件组织工程皮肤，为胎鼠表皮细胞的多向分化潜能提供良好的实验模型，并力求获得生物学性能更完整的组织工程皮肤，为临床应用提供更理想的生物修复材料。 方法：对刀片刮取法及酶消化法获取的胎鼠和小鼠表皮细胞，以角质细胞无血清培养基（K-SFM）进行培养，观察细胞生长状况及克隆形成情况，选择Pan-CK多克隆抗体对细胞进行鉴定；对酶消化法获取的胎鼠和小鼠成纤维细胞，以DMEM进行培养，观察细胞生长状况及克隆形成情况，选择vimentin单克隆抗体对细胞进行鉴定；应用培养的表皮细胞、成纤维细胞及PGA支架初步构建组织工程皮肤，观察形成皮肤及附件的情况。 结果：1.不同发育阶段胎鼠和小鼠皮肤组织结构观察揭示了皮肤附件的生长发育规律，即在胚胎14.5天(embryo14.5天, E14.5天）时，虽然表皮细胞仅为1-2层，但皮肤附件发育已经开始，，E16.5天时是皮肤附件发育最为旺盛的时期，E18.5天皮肤附件发育基本完成，生后7天(postnatal7,P7)时皮肤附件发育成熟。 2.应用刀片刮取法能成功获取E14.5天的胎鼠表皮细胞，并能建立稳定的表皮细胞系。 3应用酶消化法能分别获取E16.5天，E18.5天，生后7天的胎鼠和小鼠表皮细胞及成纤维细胞，并能建立稳定的细胞系。 4.经培养出的E14.5天胎鼠表皮细胞、成纤维细胞和PGA支架构建的组织工程皮肤，组织切片可见人造皮肤大体形态比较接近正常皮肤，表皮分层分化较完善，可见基底层、棘细胞层及角化层。 结论：1.通过对不同发育阶段胎鼠和小鼠皮肤组织结构的观察，我们初步掌握了皮肤附件的生长发育规律。 2.刀片刮取法是一种获取E14.5天的胎鼠表皮细胞较好的方法，可以得到数量较多，细胞活力较好的E14.5天的胎鼠表皮干细胞。 3.消化法是一种获得E16.5天，E18.5天，生后7天的胎鼠和小鼠表皮细胞及成纤维细胞的稳定的细胞培养技术。 4.用E14.5天胎鼠表皮细胞、成纤维细胞和PGA支架构建的组织工程皮肤，表皮结构较好，基本形态比较接近正常皮肤。 本实验以PGA为支架，通过胚胎小鼠来提供表皮细胞和真皮成纤维细胞，从而首次构建含附件的组织工程皮肤的模型，为以后构建真正意义上的含附件的组织工程皮肤提供了可靠的理论和实验依据。
【关键词】：组织工程皮肤 皮肤附件 表皮细胞 PGA
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 引言9-13
• 1.1 概述9
• 1.2 构建含附件组织工程皮肤的两个重要因素9-11
• 1.2.1 多向分化潜能的种子细胞10-11
• 1.2.2 适合的真皮来源的刺激信号11
• 1.3 本研究的总体思路11-13
• 第2章 基础材料、基础试剂及主要仪器13-15
• 2.1 基础材料13
• 2.2 基础试剂13
• 2.3 主要仪器13-14
• 2.4 其他试剂的配制14-15
• 第3章 不同发育阶段胎鼠和小鼠皮肤组织结构观察15-20
• 3.1 材料与方法15-16
• 3.1.1 主要材料15
• 3.1.2 主要试剂15
• 3.1.3 方法15-16
• 3.2 结果16-18
• 3.2.1 不同发育阶段胎鼠和小鼠皮肤组织结构的变化16-17
• 3.2.2 不同发育阶段的胎鼠和小鼠皮肤免疫荧光17-18
• 3.3 讨论18-20
• 第4章 不同发育阶段胎鼠和小鼠表皮细胞培养及鉴定20-24
• 4.1 材料与方法20-21
• 4.1.1 主要材料20
• 4.1.2 主要试剂20
• 4.1.3 方法20-21
• 4.2 结果21-23
• 4.3 讨论23-24
• 第5章 不同发育阶段胎鼠和小鼠成纤维细胞培养及鉴定24-28
• 5.1 材料与方法24-25
• 5.1.1 主要材料24
• 5.1.2 主要试剂24
• 5.1.3 方法24-25
• 5.2 结果25-27
• 5.3 讨论27-28
• 第6章 含附件组织工程皮肤模型的初步构建28-35
• 6.1 材料和方法28-29
• 6.1.1 主要材料28
• 6.1.2 主要试剂28
• 6.1.3 方法28-29
• 6.2 结果29-32
• 6.2.1 离体的 E14.5 天的胚胎小鼠皮肤体外器官培养29-30
• 6.2.2 PGA 支架材料的制备30-31
• 6.2.3 用 E14.5 天胎鼠的表皮细胞构建复合皮肤31-32
• 6.3 讨论32-35
• 第7章 全文总结35-36
• 致谢36-38
• 参考文献38-41
• 攻读学位期间的研究成果41-42
• 综述42-49
• 参考文献47-49

  本文关键词：模拟皮肤发育构建含附件组织工程皮肤的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：384810