脱细胞半月板细胞外基质的制备及其对半月板纤维软骨细胞的作用

发布时间：2017-05-22 10:28

  本文关键词：脱细胞半月板细胞外基质的制备及其对半月板纤维软骨细胞的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：实验目的：如何功能性重建损伤的半月板是再生医学面临的一个巨大挑战,本研究的目的：1.建立通过湿法粉碎、差速离心的方法制备脱细胞半月板细胞外基质(decellularized meniscal extracellular matrix, MECM)生物材料的方法;2.观察兔半月板纤维软骨细胞(Meniscal Fibrochondrocytes, MFC)体外单层扩增培养时细胞形态以及表型的变化;3.体外检测MECM对传代MFC (P3)增殖以及再分化的影响。实验方法：1.通过湿法粉碎、差速离心,将猪的半月板组织制备成MECM,并且评价MECM的理化学特性;2.兔的MFC在单层扩增培养的条件下,观察其细胞外形及其基因表达特点随着传代次数增多所发生的变化：3.将传代的MFC (P3).分别种植在由硫酸软骨素(chondroitin sulfate, CS)、MECM、MECM混合CS(比例为5：1)以及对照组(The control group, TCP,无修饰)不同方法修饰的盖玻片表面,体外培养7天、14天,检测其细胞黏附性,细胞活性,细胞增殖,细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的分泌以及特异性基因mRNA表达的特点。实验结果：由本方法制备的MECM能很好的保留半月板ECM成分,包括胶原(Collagen, COL)和糖胺多糖(glycosaminoglycans, GAG),并且较干净的去除了细胞DNA物质。MFC在单层培养的条件下经过多次传代,细胞由圆形的纤维软骨细胞样外形转变为伸长形的纤维母细胞样外形,并且可见COL Ⅰ mRNA表达的上调和COL Ⅱ mRNA表达的下调。通过CCK-8的检测发现MECM可以促进传代MFC (P3)的细胞增殖。MECM能够维持半月板细胞的活性；促进其黏附和细胞数量的增加：提高COL Ⅱ mRNA的表达水平(比TCP组高12倍,P0.05);增加GAG以及COL的分泌。番红"O"(Safranine O, SO)以及甲苯胺蓝(Toluidine Blue,TB)染色结果证实,MECM修饰的表面可以促进传代MFC的再分化。实验结论：该MECM制备方法能够较好地保留天然半月板组织的ECM成分,去除细胞DNA物质。兔MFC在单层扩增培养的条件下发生了去分化的现象。MECM可以同时促进传代去分化MFC (P3)的细胞增殖以及再分化,因此MECM可能是未来组织工程(Tissue Engineering, TE)半月板支架材料中相当有应用前景的生物材料之一。
【关键词】：半月板TE 细胞外基质 纤维软骨细胞 细胞增殖 再分化
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08;R687
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-19
• 参考文献14-19
• 实验一 MECM材料的制备19-30
• 目的19
• 材料与方法19-23
• 结果23-27
• 讨论27-28
• 结论28-29
• 参考文献29-30
• 实验二 兔MFC传代培养的表型变化研究30-38
• 目的30
• 材料与方法30-33
• 结果33-35
• 讨论35-36
• 结论36-37
• 参考文献37-38
• 实验三 MECM与传代MFC之间相互作用的研究38-61
• 目的38
• 材料与方法38-43
• 结果43-55
• 讨论55-58
• 结论58-59
• 参考文献59-61
• 缩略词表61-63
• 文献综述63-96
• 摘要63-64
• 前言64-65
• 半月板组织结构以及生物力学特性65-70
• 半月板损伤和膝关节OA的发展70-71
• 半月板损伤的分类及其治疗策略71-72
• 半月板TE支架的研究进展72-81
• 对未来半月板再生的展望81-82
• 结论82-83
• 参考文献83-94
• 缩略词表94-96
• 参加学术交流情况96-97
• 攻读学位期间发表文章情况97-98
• 致谢98

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本文编号：385454