氨基荧光探针检测用于制作人工心脏瓣膜的牛心包交联程度的研究

发布时间：2017-06-05 10:17

本文关键词：氨基荧光探针检测用于制作人工心脏瓣膜的牛心包交联程度的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的生物材料广泛应用于心血管外科领域,如：应用生物材料猪主动脉瓣、牛心包、牛颈静脉等制作心脏生物瓣膜,带瓣血管、补片等,应用前都经过交联改性处理。交联改性处理的关键步骤是使生物材料内部蛋白质分子的氨基或羧基末端之间发生交联反应,交联反应的程度直接决定了生物材料处理的效果,因此,交联度检测成为判断组织品质的重要检测方法之一。目前只有间接检测方法,且现行方法陈旧,不能准确有效的说明交联反应程度,本实验利用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯能与氨基基团发生特异性不可逆结合,且在波长为488nm的激发光下发出绿色荧光这一特性,建立一种检测生物瓣膜交联效果的新技术—氨基荧光探针法,它能量化未经交联处理的氨基数量,从而反应生物瓣膜交联程度。研究方法以0.5%浓度戊二醛交联的经脱细胞处理的牛心包为研究对象,按其与戊二醛作用时间不同分组,未经戊二醛处理的牛心包为对照组(A组),0.5%戊二醛处理组分为：10分钟组(B组),30分钟组(C组),6小时组(D组)。各组反应后洗脱戊二醛,将牛心包作快速冰冻切片,在避光条件下与羧基荧光素琥珀酰亚胺酯反应2小时后于荧光显微镜下观察各组荧光强度并拍照,用特殊的荧光分析软件分析每张图片的荧光强度,作统计学处理,比较各组平均荧光强度差异。同时对各组牛心包组织提蛋白行聚丙烯酰胺凝胶电泳,比较新方法与传统方法检测牛心包交联程度的差异。结果荧光显微镜下可见随交联时间增加绿色荧光越弱,荧光强度对照组(A组)10分钟组(B组)30分钟组(C组)6小时组(D组),差异具有显著统计学意义(P0.01)。传统方法聚丙烯酰胺凝胶电泳从A组到D组可提取蛋白越来越少。结论羧基荧光素琥珀酰亚胺酯是一种有效的荧光试剂,可以与氨基基团特性性结合行成一种稳定的连接,并在488nm波长光激发下发出绿色荧光,与传统检测生物瓣膜交联度方法相比,更为直观、灵敏,且能反应瓣膜组织任何部位、任何层厚的的交联效果,同时这一方法可能用来揭示其它交联剂反应的原理。
【关键词】：羧基荧光素琥珀酰亚胺酯 牛心包 人造生物瓣膜 交联度
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R654.2;R318.08
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