基于细胞膜片技术复合富血小板纤维蛋白（PRF）构建可注射的组织工程骨的实验研究

发布时间：2017-06-09 03:02

  本文关键词：基于细胞膜片技术复合富血小板纤维蛋白（PRF）构建可注射的组织工程骨的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【背景】 骨不连和骨缺损的修复治疗仍然是临床上非常复杂的难题。幸运的是，近年来在再生医学中取得的进展已能够将细胞治疗用于骨再生中。组织工程（tissueengineering）是指应用工程学和生命科学的方法和技术来构建生物替代物以恢复或改善组织功能的科学。然而，在移植组织工程化的骨或自体骨时往往需要开放的手术，与传统的外科移植方式相比较，使用注射技术的骨修复方法有其明显的优势，比如说易于操作，风险性低，几乎没有手术疤痕形成，微创和更好的可重复性等。 近年来，，细胞膜片已经被证实为是在骨组织工程中非常有效的方法。通过成骨诱导形成的细胞膜片柔软可皱缩，易于改变外形，并且厚度也可以控制。目前，已经有将细胞膜片剪成大小合适的片段来构建可注射的组织工程骨的实验研究，但实验中没有加入生长因子，成骨能力有待提高。所以本实验旨在通过加入能够释放自体生长因子的富血小板纤维蛋白，观察其成骨能力有无提高。 【目的】 探讨应用富血小板纤维蛋白(PRF)膜片与骨髓基质干细胞（BMSCs）成骨性膜片构建可注射组织工程骨的可行性，并摸索PRF在体内外对BMSC成骨膜片的影响。 【方法】 1．分离培养兔骨髓间充质细胞并构建骨髓间充质干细胞成骨性膜片。 2．然后抽取同一供体兔的动脉血制备PRF膜片，对制备的PRF膜片分别行HE染色，扫描电镜和投射电镜观察；并制备不同梯度浓度的PRF培养基，探讨其对细胞生长作用的浓度依赖关系；进一步制备最佳浓度的含PRF的成骨诱导培养基，体外观察含有PRF的成骨诱导培养基对BMSC膜片的影响，RT-PCR检测其成骨相关基因的表达变化情况。 3．体内实验：将制备好的PRF膜片剪碎，与前述制备的BMSC膜片片段混匀后，注射到裸鼠背部皮下。不混合PRF的单纯BMSC膜片片段作为对照组。术后6周取材，进行大体观察、体外X线扫描、Micro-CT、组织学等方法评价。 4．采用SPSS18.0统计软件对实验中相关数据进行方差分析或是随机分组的两组间均值的t检验。 【结果】 1．通过上述方法可以构建出BMSC膜片且其具有成骨分化特征。 2．抽取动脉血制备的PRF对BMSC的生长刺激具有浓度依赖效应。每一毫升动脉血制备的PRF置于两毫升的培养基中为最佳的刺激浓度，细胞生长最好。 3．体外，PRF对MBSC膜片具有刺激作用：RT-PCR结果提示含最适宜浓度的PRF的成骨诱导液会促进BMSC膜片成骨基因的表达，结果有统计学差异。 4．BMSC膜片注射入裸鼠体内后形成的硬组织，外形较好，Micro-CT和体外X线拍片显示为异位矿化物，实验组较对照组密度高，重量也较重，组织学切片证明有骨组织形成；且实验组有更好的成骨特性。 【结论】 1．BMSC可以经诱导形成膜片样结构，且具有成骨分化特征。 2．PRF可以促进BMSC的增殖生长。且体外可以增强BMSC成骨性膜片相关成骨基因的表达。 3．将BMSC成骨性膜片和PRF剪碎混匀后，注射到裸鼠皮下，有新生骨组织形成，且PRF可以增加BMSC成骨膜片的骨形成能力，结果有统计学意义。本研究为构建组织工程骨提供了全新的方法和思路，应用前景广阔，为组织工程骨基础研究和临床应用提供了实验依据。
【关键词】：细胞膜片 骨髓基质干细胞 富血小板纤维蛋白 组织工程 骨 注射
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 文献回顾13-23
• 实验一 兔骨髓干细胞的分离培养和鉴定的实验研究23-32
• 1 材料23-24
• 2 方法24-26
• 3 结果26-29
• 4 讨论29-32
• 实验二 BMSC 膜片的构建及其成骨分化的实验研究32-43
• 1 材料32-33
• 2 方法33-35
• 3 结果35-39
• 4 讨论39-43
• 实验三 PRF 的制备及其对 BMSC 和 BMSC 膜片的影响43-55
• 1 材料44-45
• 2 方法45-47
• 3 结果47-52
• 4 讨论52-55
• 实验四 BMSC 成骨性膜片复合 PRF 膜片注射入裸鼠体内异位成骨的实验研究55-66
• 1 材料56-57
• 2 方法57-58
• 3 结果58-63
• 4 讨论63-66
• 小结66-67
• 参考文献67-83
• 个人简历和研究成果83-84
• 致谢84-85

【引证文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 徐海燕;刘斌;安然;;富血小板纤维蛋白的研究进展[J];口腔医学研究;2015年09期

  本文关键词：基于细胞膜片技术复合富血小板纤维蛋白（PRF）构建可注射的组织工程骨的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：434261