P-15新型生物材料在治疗椎体压缩骨折中应用的基础实验研究

发布时间：2017-06-16 11:05

  本文关键词：P-15新型生物材料在治疗椎体压缩骨折中应用的基础实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：检测P-15肽对软骨细胞形态，碱性磷酸酶水平，软骨细胞基因的改变以及对蛋白表达的外源性影响。此外，利用在小鼠体内实验模型来模仿骨折骨痂形成和评估的P-15肽对骨髓间充质干细胞吸引、软骨细胞分化、以及成骨和软骨骨化的影响，以期望为椎体成形术微创治疗椎体压缩性骨折寻找新的生物填充材料。 方法：体外实验：我们使用小鼠的MSC(骨髓间充质干细胞系)，使用软骨培养液，，条件在37oC、5%CO2环境中进行培养，在本实验中使用的是MSC培养出来的6-14代细胞。首先准备好2种不同朔料培养盘，一种上面铺有P-15肽物质，另一种培养盘没有经过任何处理作为对照组。然后取培养皿中的细胞（8X10~4）分别接种不同的培养盘中。每隔2天更换一次培养液，然后分别提取3、6、9、12天的细胞作为分析对象。我们利用这些提取的细胞分别进行了软骨微细胞团的培养和染色，免疫组织化学分析，同时进行图像的采集和分析，蛋白的定量和印迹分析。体内实验：P-15和rhBMP-2按照一定的比例结合起来被用作刺激骨骼生长的一种药品,实验用的动物是8-12周的雄性小白鼠，首先使其在新的环境中适应2天，以便调整其身体机能，保证实验的准确性。然后我们给小白鼠进行体内注射皮丘实验，每个小皮丘的基质胶的总量是250ul，具体分为2组，1：基质胶+rhBMP-2（左侧），2：基质胶+rhBMP-2+P-15（右侧），并且同时注入一只小鼠体内，并分别在注射后12和20天通过二氧化碳窒息法猝死小鼠,取出小鼠体内形成的微型颗粒状物质，及小皮丘，我们对该微粒进行微型CT分析，并且完成相应的组织学实验研究（切片、染色及图像处理分析）。 结果：体外实验，组织切片的结果：P-15肽促进软骨细胞增殖，促进软骨细胞分化。体内实验，小鼠模型中P-15+rhBMP这种复合物相比较单独加入rhBMP可以增加骨髓间充质干细胞（MSC）吸附和增殖、增加颗粒骨化和软骨沉积、同时增加体内关键蛋白表达。 结论：P15可以增强骨细胞粘附、促进细胞分化、迁移及提高细胞存活率，重要的是可以促进骨再生，从而p-15可作为新型填充材料应用于椎体压缩性骨折治疗中。
【关键词】：P15 骨质疏松 压缩性骨折
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R683.2;R318.08
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-16
• 1.1 椎体压缩性骨折的原因与治疗11
• 1.1.1 椎体压缩性骨折的原因11
• 1.1.2 椎体压缩性骨折的治疗11
• 1.2 椎体成形术的分类及应用11-13
• 1.2.1 椎体成形术分类11-12
• 1.2.2 椎体成形术在骨质疏松性椎体骨折中的应用12
• 1.2.3 椎体成形术在椎体肿瘤中的应用12-13
• 1.2.4 椎体成形术的并发症13
• 1.3 病人的选择13-14
• 1.4 实验的研究背景14-16
• 第2章 资料与方法16-20
• 2.1 体外实验16-18
• 2.1.1 细胞培养16
• 2.1.2 软骨微细胞团培养和染色16-17
• 2.1.3 免疫组化分析17
• 2.1.4 图像采集和分析17
• 2.1.5 蛋白提取和 Western Blot（蛋白质印迹）分析17-18
• 2.2 体内实验18-19
• 2.2.1 生物基质胶分析18-19
• 2.2.2 微型 CT 分析19
• 2.2.3 组织学分析19
• 2.3 统计方法19-20
• 第3章 结果20-23
• 3.1 体外实验结果20-21
• 3.1.1 P-15 肽促进软骨细胞增殖20
• 3.1.2 P-15 肽促进软骨细胞分化20
• 3.1.3 P-15 诱导 a5β1 整合并激活磷酸化 FAK 信号通路20-21
• 3.2 体内的实验结果21-23
• 3.2.1 小鼠模型中 P-15+ rhBMP 这种复合物可以增加骨髓间充质干细胞（MSC）吸附和增殖21-22
• 3.2.2 P-15+ rhBMP 复合物增加颗粒骨化和软骨沉积22
• 3.2.3 P15 + rhBMP 复合物增加体内关键的蛋白表达22-23
• 第4章 讨论23-26
• 结论26-27
• 参考文献27-32
• 附图32-37
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果37-39
• 致谢39

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘康,季晖,李绍平,于冰,李耐三;三种大鼠骨质疏松模型的比较研究[J];中国骨质疏松杂志;1998年04期

  本文关键词：P-15新型生物材料在治疗椎体压缩骨折中应用的基础实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：455192