巨噬细胞参与扩张皮肤新生的实验研究

发布时间：2023-02-01 13:43

　　研究背景大面积皮肤组织缺损是整形外科修复的难点问题。目前修复缺损方法包括皮片移植、皮瓣移植、异体复合组织移植以及皮肤软组织扩张术等方法。然而,移植皮片颜色、质地与受区差异较大,移植皮片后期常常发生挛缩,取皮部位还可能遗留明显瘢痕;局部皮瓣转移虽能提供与受区相似的皮肤组织,但局部皮瓣难以获取足够组织修复较大创面;同种异体血管化复合组织移植例如颜面移植、手移植等虽然能一次性提供与受区形状、结构、质地相似的组织,但该方法技术难度大,且术后长期使用的免疫抑制剂所带来的毒副作用也限制了其推广。皮肤软组织扩张术作为整形外科常规的技术之一,在临床应用广泛。扩张术能提供与受区颜色、质地相似的“额外”皮肤组织,并且不对供区造成继发损害。尽管如此,扩张术依然存在一系列问题,如皮肤扩张效率不佳、手术周期长、手术并发症相对较多、扩张机制研究不清等问题。因此,进一步研究在机械应力作用下扩张皮肤新生机制十分必要。皮肤的扩张过程,类似一种组织反复损伤、修复的过程。组织损伤后,免疫细胞尤其是单核/巨噬细胞会迁移到损伤部位,参与坏死细胞的清除以及组织修复与再生。根据表型以及功能的不同,巨噬细胞可以分为M1型巨噬细胞以及... 

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
第一部分 皮肤扩张过程中巨噬细胞数量及亚型变化
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 实验试剂配制
    2 方法
        2.1 大鼠背部扩张模型构建
        2.2 实验动物分组
        2.3 扩张皮肤组织化学染色
        2.4 扩张皮肤与正常皮肤总RNA提取及反转录
        2.5 扩张皮肤M1、M2 相关细胞因子qPCR分析
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 SD大鼠背部扩张模型的建立及大体观察
        3.2 扩张皮肤HE染色
        3.3 扩张皮肤CD68 免疫组化染色
        3.4 免疫荧光探究在扩张过程中皮肤巨噬细胞数量变化
        3.5 扩张过程中皮肤M1、M2 型巨噬细胞动态变化
        3.6 扩张皮肤包膜中巨噬细胞数量及亚型动态变化
        3.7 扩张皮肤M1、M2 相关细胞因子qPCR检测
    4 讨论
第二部分 巨噬细胞在扩张过程中作用及其机制研究
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 实验试剂的配制
    2 方法
        2.1 大鼠扩张皮瓣局部巨噬细胞耗竭模型构建
        2.2 巨噬细胞耗竭对于扩张皮肤新生/再生的影响
        2.3 巨噬细胞耗竭扩张皮肤、对照皮肤以及正常皮肤RNA提取及反转录
        2.4 巨噬细胞耗竭扩张皮肤、对照扩张皮肤中生长因子PCR检测
        2.5 统计学分析
    3 结果
        3.1 成功构建扩张皮瓣局部巨噬细胞耗竭模型
        3.2 巨噬细胞耗竭后扩张皮肤新生面积减少
        3.3 巨噬细胞耗竭后扩张皮肤厚度变薄
        3.4 巨噬细胞耗竭后扩张皮肤真皮胶原合成减少
        3.5 巨噬细胞耗竭后扩张皮肤并发症情况
        3.6 巨噬细胞耗竭后扩张皮肤增殖活跃细胞减少
        3.7 巨噬细胞耗竭后扩张皮肤血管化变差
        3.8 巨噬细胞耗竭后局部生长因子水平降低
    4 讨论
第三部分 体外实验探究巨噬细胞极化后相关作用
    1 材料
        1.1 细胞系及实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 实验试剂
    2 方法
        2.1 巨噬细胞极化诱导
        2.2 流式细胞术检测巨噬细胞极化
        2.3 胎鼠成纤维细胞(Mouse embryo fibroblast,MEF)获取
        2.4 M1、M2 型巨噬细胞上清对胎鼠成纤维细胞胶原合成的影响
        2.5 qPCR检测M1、M2 型巨噬细胞生长因子水平
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 264.7细胞成功诱导为M1 以及M2 型巨噬细胞
        3.2 巨噬细胞极化后生长因子表达情况
        3.3 M2 型巨噬细胞上清促进胎鼠成纤维细胞胶原合成
    4 讨论
小结
参考文献
附录
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3734214