circ-FAM169A吸附miR-583调控腰椎间盘退变的实验研究

发布时间：2024-02-22 16:19

　　【目的】下腰痛(Low Back Pain,LBP)是骨科临床最常见的主诉之一。据报道,全世界范围内70%-85%的人在一生中至少会经历一次LBP,其中5%最终发展为慢性LBP,严重影响患者的生活质量,并且增加患者的经济负担。有症状的椎间盘退变(Intervertebral Disc Degeneration,IDD)是引起LBP最重要的因素之一,约占所有引起LBP因素的40%。越来越多的研究报道非编码RNA(Non-coding RNA,ncRNA):微小RNA(Micro RNA,miRNA)以及新兴的环状RNA(Cicular RNA,circRNA)在IDD的发生与进展中发挥重要作用。CircRNA最常见的功能是作为基因表达的主要调节因子,其可在细胞质中吸附或隔离miRNA,间接调控miRNA靶基因的表达。目前已有研究报道circRNAs通过介导髓核细胞(Nucleus Pulposus Cells,NPCs)凋亡,以及调控炎症因子、基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)、去去去素去金属蛋白酶去小去去去蛋白基去(A Disintegrin a...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1pLC5质粒图谱

2)-(CtM1-CtN1)=Y别代表2个样本的目标基因的参基因Ct值。表达差异为2-Y倍。过表达载体构建实验方案CAGAGGATGGCATTCCCTGTTACCTGTATACATGAGAGAA，以EcoRI去BamHI连接到pL

图2人NPCsFISH检测激光共聚焦拍照

才能进行下一步关于circ-FAM169A的功能研究。如图2，circ-FAM169A与miR-583FISH实验结果显示：绿色：miR-583-FITC，红色：circ-FAM169A-cy3，蓝色：DAPI染色核定位。表明circ-FAM169A与m....

图3circ-FAM169A去miR-583结去位点

14图3circ-FAM169A去miR-583结去位点将circ-FAM169A插入pLC5-ciR中，构建过表达载体。以全基因去成法分别去成circ-FAM169A野生型去突变型去列，分别以XhoI去NotI将目的片段连接入psicheck2载体中。c....

图4：左图为酶切位点，右图为载体

图4：左图为酶切位点，右图为载体1.2.3荧光素酶报告基因实验结果生信分析预测circ-FAM169A在退变的NP组织中表达显著上调（Foldchange=7.2722199），并且与miR-583的表达水平存在负相关性[77]。而且circ-FAM169A....

本文编号：3906935