14-3-3ε激活NF-κB通路参与氧糖剥夺/再灌注诱导的原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞活化

发布时间：2024-02-29 21:15

　　目的:研究14-3-3ε蛋白对氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation reperfusion,OGDR)诱导的脊髓星形胶质细胞活化的影响及其机制。方法:原代培养新生SD大鼠脊髓星形胶质细胞建立OGDR模型,用CCK-8试剂盒检测细胞活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性检测试剂盒检测LDH活性,用ELISA法检测谷氨酸浓度、TNF-α和IL-1β的表达,Real-Time PCR和Western Blot分别检测14-3-3εmRNA和蛋白表达,用Western Blot检测核转录因子-B(Nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)、星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、胶质瘢痕标志物neurocan和phosphacan蛋白的表达;转染14-3-3εsiRNA沉默14-3-3ε表达,将细胞分为对照组、OGDR组、非特异性转染(Scramble)组和14-3-3εsiRNA组,检测14-3-3εsi...

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【文章目录】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂
    2 方法
        2.1 细胞培养和鉴定
        2.2 OGDR模型的建立
        2.3 siRNA转染
            2.3.1 CCK-8
            2.3.2 LDH活性检测
            2.3.3 ELISA法
        2.4 Real-Time PCR
        2.5 Western Blot
结果
    1细胞鉴定
    2 OGDR诱导星形胶质细胞损伤
    3 OGDR诱导星形胶质细胞活化及胶质瘢痕形成
    4 14-3-3ε在星形胶质细胞OGDR后表达增加
    5 14-3-3εsiRNA转染对14-3-3ε表达的影响
    6 14-3-3ε基因沉默对OGDR诱导的星形胶质细胞活化和胶质瘢痕形成的影响
    7 14-3-3εsiRNA抑制NF-κB表达阻碍星形胶质细胞活化
讨论



本文编号：3914934