SHH基因修饰的鼻黏膜间充质干细胞治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

发布时间：2024-03-02 00:09

　　脊髓损伤(spine cord injury,SCI)对患者造成的影响无疑是毁灭性的,同时也会带来各种家庭及社会问题,近年来SCI发病率呈现逐年增高趋势。脊髓损伤后,上下神经传导束的断裂、溃变是造成损伤平面以下肢体感觉和运动功能障碍的直接原因。脊髓损伤区继发炎症反应,组织坏死,形成空腔;胶质细胞大量增生形成的瘢痕组织阻碍神经纤维的再生,最终导致神经元和神经纤维的坏死、溃变。大鼠鼻黏膜间充质干细胞(Ectomesenchymal stem cells,EMSCs)具有取材简变、易于分离和体外培养,并且它可由供体提供而不涉及伦理问题,是用于细胞移植的理想种子细胞。在治疗脊髓损伤方面,鼻黏膜EMSCs可以分泌细胞活性因子和细胞外基质,可改善脊髓损伤处微环境,填补坏死空腔,桥接脊髓断端,恢复解剖结构,引导内源性神经纤维网络再生。然而,由于脊髓损伤后局部微环境的改变,鼻黏膜EMSCs移植后,大量细胞不能很好地存活。音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)是胚胎发育过程中由脊索产生的一种因子,SHH决定了神经系统的发育和分化过程。体外研究表明,SHH可诱导成体干细胞分化为运动神经元和少突胶...

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【部分图文】：

图1：鼻黏膜EMSCs体外培养扩增显微镜下表现A：原代培养5d显微镜下形态

三角形、细长型细胞聚集成团同时开始出现细胞间连接（图1B）；培养至10d后，此时的鼻黏膜EMSCs增殖能力明显增强，细胞铺满瓶底90%以上，且形态开始均一，开始呈现出梭形生长(图1C)。图1：鼻黏膜EMSCs体外培养扩增显微镜下表现A：原代培养5d显微镜下形....

图2免疫荧光染色下鼻黏膜EMSCs对Nestin、Vimentin、Connexin-43及CD133蛋白的表达Bar=25μmFig.2ExpressionofNestin,Vimentin,Connexin-43andCD133proteininnasalmucosa

图2免疫荧光染色下鼻黏膜EMSCs对Nestin、Vimentin、Connexin-43白的表达Bar=25μmFig.2ExpressionofNestin,Vimentin,Connexin-43andCD133proteininEMSCs....

图4：SHH-EMSCs成骨诱导分化及成脂诱导分化A：SHH-EMSCs成骨诱导21d钙

江苏大学硕士学位论文图3第四代鼻黏膜EMSCs生长曲线Fig3：RelativecellgrowrateoffourthgenerationnasalmucosaEMSCs4.4鼻黏膜间充质干细胞成骨诱导分化及成脂诱导分化成骨诱导培养基中定向成骨诱导分....

图1SHH腺病毒对EMSCs的转染效率及形态学观察A:SHH-EMSCs于荧光显微镜下表现为绿色荧光B同一视角SHH-EMSC白光下形态Bar=25μm

江苏大学硕士学位论文显微镜下使用红色荧光激发出的带绿光的SHH-EMSCs，同图1C融合来看SHH基因转染效率可达95%以上。这表明了经293A细胞扩增的SHH腺病毒对鼻黏膜EMSCs具有很高的转染效率，同时转染后不会对鼻黏膜EMSCs本身的细胞形态学有....

本文编号：3916026