人脱细胞羊膜负载家兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜修复大段骨缺损的实验研究

发布时间：2024-03-09 16:03

　　目的随着细胞生物学和组织工程学的不断发展,为治疗骨缺损[1-2]开辟了新的领域。即在骨缺损处放置膜作为机械屏障,可将周围结缔组织阻挡于缺损处,产生特殊的再生空间,使骨生成细胞优先生长,产生新骨而达到促进骨性愈合的目的,诱导膜技术也是基于这一原理。选择理想的膜与膜下材料联合应用修复骨缺损是关键。本项目拟构建生物学活性与人体骨膜相似的组织工程骨膜,即骨髓间充质干细胞(BMSCs)[3]和取健康足月孕妇羊膜制备人脱细胞羊膜(HAAM)[4]复合而成,体外观察组织工程骨膜的生物活性,并检测其相容性,为体内修复大段骨缺损奠定基础。由于大节段负重骨缺损的修复尤为困难[5],动物试验中组织工程骨膜技术有望成为临床治疗骨缺损良方。构建的组织工程骨膜,其相关研究为骨组织工程和治疗的发展提供了新的机会,逐渐成为一个热点,为骨缺损部位制造伪骨膜提供了可能性。方法人脱细胞羊膜与家兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜的体外实验研究。通过HE染色、扫描电镜(SEM)下观察人脱细胞羊膜的结构,MTT描绘出骨髓间充质干细胞在人脱细胞羊膜上的生长情况,钙结节染色检测(茜素红染色、Von kossa染色)、ALP(碱性磷酸...

【文章页数】：35 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１原代细胞

第１？２代细胞间的贴壁和生长速度无明显区别，呈比原代更均匀的长梭形，细??胞间隔更均匀，传至第３代时无明显变化。其中传代１－２天为潜伏生长期，３－６??天为对数生殖期，对数增殖期结束后进入平台期和下降期。如图１．２．?３所示为家??兔骨髓间充质干细胞形态学图片。??图１原代细胞?....

图４骨髓间充质干细胞成骨的鉴定??

诱导至２周左右倒置相差显微镜下可见集落生长的细胞群体，呈漩涡团状向??四周放射生长，形成多个分布不均、大小不一、形态各异的钙素结节，逐渐增大，??３周后被茜素红染成玫瑰红色。如图４所示成骨细胞检测的结果。??ｕ?４ｋ．?？ｍ＂＇＇?＊?ｙ?ｘ?７＇ｍ??６?二二’?务．??ｉＴ?....

图５人脱细胞羊膜??．

．经物理及化学等方法处理获得的人脱细显示大量的粉红色胶原细胞外基质，呈网状未见有细胞形态的结构。如图６．?７所示。??

图７电镜下观察??

?图７电镜下观察??兔骨髓间充质干细胞负载于人脱细胞髓间充质干细胞负载于人脱细胞羊膜（实验增殖情况，接种后第２天细胞开始增殖，第３验组及对照组细胞增殖速度无显著性差异（ｐ增殖的高峰，实验组第７天细胞达增殖高峰，３天，５天实验组与对照组增殖细胞量的组间，对照组增殖细胞量比实验组少；....

本文编号：3923596