慢性HBV感染不同转归者免疫调节基因拷贝数及表达研究

发布时间：2024-02-26 18:45

　　乙型肝炎病毒(Heptitis B virus,HBV)为嗜肝部分双链DNA病毒,慢性HBV感染者约有25%-40%可能死于肝硬化和肝癌,对不同预后患者的宿主遗传特征进行研究,是目前关注的重点之一。HBV引起的肝脏病理损伤非病毒直接破坏,而是与宿主细胞免疫反应密切相关。已有大量研究发现,肝脏炎症程度影响临床转归,而慢性HBV感染者的肝脏炎症程度除病毒因素之外,与宿主T细胞免疫功能密切相关。 研究表明,T淋巴细胞功能受到免疫调节因子的调控。其中PD-1、Bim、IL-7Rα等调节蛋白对T淋巴细胞功能的调节是近年来研究的热点,它们在HBV感染慢性化中的作用已经比较明确。PD-1(Programmed death 1,PD-1)基因PDCD1位于人类基因组2q37.3,其基因表达蛋白PD-1是一类能够显著抑制T细胞活化和调节免疫应答的CD28/B7家族成员;研究认为PD-1过度表达是功能耗竭T细胞的特征,PD1/PD-L1通路可产生抑制信号,影响T细胞清除病毒功能。Bim(Bcl2-interacting mediator,Bim)基因Bcl2l11位于人类基因组2q13,是Bcl-2家族促...

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【部分图文】：

图1各目的基因PCR产物

隆以上目的基因（Bcl2l11、RNaseP引物来自Aays）PCR程序：预性94℃1min,退火94℃30s→in(30cycles)，72℃6minPCR程序:预性94℃1min,退火94℃30s→in(30cycles)，72℃....

图2单克隆阳性重组子PCR产物9重组质粒抽提

含100ug/ml的氨苄青霉素LB培养液中，37℃，250rpm恒温摇床养菌液PCR鉴定，各取每管细菌菌液1ul为模板、用通用引物：M13F-GTTTCCCAGTCACAGC，M13R-CAGGAAACAGCTATGAC反应体系如下:PremixEXTaq....

图3各目的基因标准曲线

RnaseP：Y=3.2x+44.1R2=0.99；CD127：Y=-3.3x+49.0R2=0.99图3各目的基因标准曲线11基因组DNA浓度测量OD260、OD260/280及将基因组DNA稀释成5ng/ul11.1取出20ul原液,用AE....

图1单克隆阳性重组子PCR产物电泳

6.3反应体系如下:PremixEXTaq2x10ul，M13F0.5ul，M13R0.5ul，菌液1ulddH208ul。6.4扩增程序:95℃预变性5min，95℃变性5s，60℃退火31s，72℃延伸2min,7℃延伸6min,循环数....

本文编号：3911694