细胞色素P4501A1酶在非酒精性脂肪肝的表达和部分作用机制的研究

发布时间：2024-03-24 14:49

　　非酒精性脂肪肝疾病的发展过程中,氧化应激在非酒精性脂肪肝脂质过氧化作用中起到关键的作用。研究表明,当去除病因(高脂高糖饮食)后,肝脏的脂质积累可自发逆转。芳香受体(Aryl hydrocarbon receptor;AHR)是一种配体激活的转导因子,多环芳香烃化物苯并芘(Benzo[a]pyrene;BaP)是一种广泛认知的AHR激动剂,当激动剂与芳香受体结合后,AHR转移到细胞核的位置与ARNT构成二聚体,继而形成的二聚体与细胞色素P4501A1酶(Cytochrome P450 1A1;CYP1A1)蛋白合成的启动基因连接,激发CYP1A1蛋白的转录和翻译过程。CYP1A1是一种重要的调节活性氧生成的酶。研究显示,CYP1A1在非酒精性脂肪肝中的蛋白表达是升高的,但是其在非酒精性脂肪肝中的起到什么样的作用还不清楚。综合以上的文献,本课题意在说明CYP1A1在非酒精性脂肪肝起到催化脂质过氧化的作用,沉默CYP1A1在非酒精性脂肪肝中的高表达,能够减弱非酒精性脂肪肝中的脂质过氧化作用。为了深化对CYP1A1在非酒精性脂肪肝中作用的探讨,本课题首先检测了CYP1A1在非酒精性脂肪肝进展期...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
1.实验材料与仪器
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 实验动物和细胞
        1.1.2 主要试剂
    1.2 仪器
    1.3 主要试剂和溶液的配制
2.实验方法
    2.1 小鼠动物模型的建立
    2.2 小鼠肝组织病理学检测
        2.2.1 HE染色
        2.2.2 肝指数的测定
        2.2.3 血清ALT和AST测定
    2.3 HepG2细胞培养和传代
    2.4 细胞水平逆转实验
    2.5 MTT实验
    2.6 油酸诱导的脂肪变性
    2.7 细胞的油红染色
    2.8 甘油三脂的测量
    2.9 CYP1A1-siRNA转染油酸诱导的HepG2细胞
    2.10 BaP刺激作用
    2.11 细胞超氧化物歧化酶(SOD)的测定
    2.12 细胞活性氧(ROS)的测定
    2.13 肝脏/细胞丙二醛(MDA)的测定
    2.14 细胞4-羟基壬烯酸(HNE)的测定
    2.15 Real-timePCR实验
        2.15.1 细胞总RNA的提取
        2.15.2 反转录
        2.15.3 RealtimePCR测定CYP1A1和CYP1A2mRNA的表达变化
    2.16 细胞/组织总蛋白的提取
    2.17 BCA蛋白定量
    2.18 蛋白免疫印迹实验
    2.19 统计学数据分析处理
3.实验结果
    3.1 CYP1A1在非酒精性脂肪肝肝组织中及逆转肝组织中的表达变化
        3.1.1 小鼠肝脏外观
        3.1.2 小鼠肝组织HE染色
        3.1.3 小鼠肝脏指数
        3.1.4 小鼠血清ALT及AST的含量变化
        3.1.5 小鼠非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝逆转组肝组织中CYP1A1蛋白的表达变化
        3.1.6 丙二醛(MDA)在小鼠脂质积累模型组和脂质积累逆转组中的含量变化
    3.2 细胞水平体外造脂质积累模型以及CYP1A1在脂质积累模型中的表达情况
        3.2.1 MTT法检测不同浓度的油酸造模液对HepG2细胞増殖的影响
        3.2.2 油酸诱导的HepG2细胞造体外脂质积累模型的油红O染色结果和甘油三酯含量
        3.2.3 不同时间点CYP1A1蛋白在油酸刺激的HepG2细胞的表达变化
        3.2.4 不同时间点CYP1A1mRNA在油酸刺激的HepG2细胞中表达变化
    3.3 体外细胞逆转实验
        3.3.1 CYP1A1在逆转的HepG2细胞中的表达变化
        3.3.2 脂质积累模型组和脂质积累逆转组中脂质过氧化水平的变化
    3.4 CYP1A1-siRNA对油酸刺激的HepG2细胞中CYP1A1和CYP1A2表达的影响
        3.4.1 CYP1A1-siRNA对油酸刺激HepG2细胞中CYP1A1和CYP1A2蛋白表达的影响
        3.4.2 CYP1A1-siRNA对油酸刺激的HepG2细胞中CYP1A1和CYP1A2mRNA表达的影响
    3.5 沉默CYP1A1的表达降低脂质积累模型中的氧化应激和脂质过氧化作用
        3.5.1 CYP1A1-siRNA对油酸诱导的HepG2细胞中ROS和SOD水平的影响
        3.5.2 CYP1A1-siRNA对HepG2细胞中MDA和HNE水平的影响
    3.6 苯并芘(BaP)通过刺激CYP1A1的高表达加重油酸刺激的HepG2细胞中的脂质过氧化作用
        3.6.1 在苯并芘(BaP)处理HepG2细胞中CYP1A1的mRNA和蛋白的表达变化
        3.6.2 苯并芘(BaP)对HepG2细胞中MDA和SOD的影响
4.讨论
5.结论
参考文献
个人简历
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3937613