环氧烷胺衍生物修饰siRNA负载脂质体的肺部给药研究

发布时间：2017-04-05 02:10

  本文关键词：环氧烷胺衍生物修饰siRNA负载脂质体的肺部给药研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:制备负载Survivin si RNA、MRP1 si RNA的新型类脂质体用于肺部给药,与抗癌药物顺铂联用逆转肿瘤耐药性,考察该给药系统对于si RNA的递送能力。方法:合成三种具有不同碳链长度和氨基结构的环氧烷胺衍生物EAADs(Epoxy Alkyl Amine Derivative Lipidoids,EAADs),采用1H-NMR、FT-IR进行结构表征。采用乙醇注入法制备EAADs、PEG-EAADs和EGFR m Ab-PEG-EAADs类脂质体,通过流式细胞仪和共聚焦显微镜观察其在A549/DDP细胞中的摄取和分布情况,喷雾冷冻干燥法制备成干粉吸入剂。以顺铂为抗癌药物,采用负载Survivin si RNA和MRP1si RNA的EAADs类脂质体转染A549/DDP细胞后,MTT法检测该细胞对顺铂的敏感性,Western Blot法检测Survivin蛋白和MRP1蛋白表达情况,Annexin V-FITC/PI双染法和碘化丙啶(PI)法分别检测A549/DDP细胞给予Survivin si RNA后的凋亡及周期变化情况。采用IVIS LuminaⅡ小动物活体成像仪观察静脉注射和肺部吸入给药时负载Cy5-si RNA的EAADs类脂质体在裸鼠体内的分布情况。在Luci-A549原位肺癌模型上通过小动物活体成像仪监测肿瘤生长情况以考察负载Survivin si RNA和MRP1si RNA的EGFR m Ab-PEG-EAADs类脂质体与顺铂联用时在裸鼠身上的抗肿瘤效果。最后进行相关指标的血液生化学分析以及对肺组织HE染色进行病理观察。结果:EAADs类脂质体外形圆整、粒径在200 nm左右,载体安全性良好,对si RNA具有较好的保护作用,满足给药需求。喷雾冷冻干燥法制得的干粉吸入剂物理粒径为11.90±0.57μm、空气动力学粒径为2.45μm、引湿性为6.64±1.12%。该法制得的干粉具有多孔低密度特征,空气动力学粒径符合肺部给药要求。EAADs-3类脂质体在A549/DDP细胞上的摄取明显高与EAADs-1和EAADs-2类脂质体,PEG修饰后摄取率增加,且EGFR m Ab-PEG-EAADs-3类脂质体更倾向于定位在A549/DDP细胞的细胞质中。EGFR m Ab-PEG-EAADs-3类脂质体在A549/DDP-Raw264.7共培养体系中主要能够选择性的进入A549/DDP细胞。通过Western Blot法筛选出高沉默效率的Survivin si RNA序列和MRP1 si RNA序列,以EAADs-3、PEG-EAADs-3和EGFR m AbPEG-EAADs-3类脂质体作为转染试剂将Survivin si RNA(或MRP1 si RNA)转染进A549/DDP细胞后,A549/DDP细胞对顺铂的敏感性提高,相应蛋白的表达量下降,此外转染Survivin si RNA后的细胞凋亡率上升,G2期延长。体内分布结果显示雾化吸入以及干粉吸入EAADs类脂质体相对于静脉注射给药能延长药物在肺部的滞留时间。体内抗肿瘤结果显示联合使用Survivin si RNA、MRP1 si RNA和DDP组肿瘤抑制要强于单独使用DDP组,肝肾功能没有明显损伤。结论:EGFR m Ab-PEG-EAADs-3类脂质体具有良好的递送基因药物的潜力,有望通过肺部给药给予相关si RNA,逆转肿瘤耐药性,增强顺铂的治疗效果。
【关键词】：EAADs 肺部给药 Survivin siRNA MRP1 siRNA A549/DDP
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文献综述11-17
• 1 si RNA11-12
• 1.1 Survivin11-12
• 1.2 MRP112
• 2 si RNA给药系统常用策略12-14
• 2.1 延长循环时间13
• 2.2 增强靶向性13
• 2.3 促进溶酶体逃逸13-14
• 3 给药途径的选择14-15
• 4 本研究的意义和目的15-17
• 第二章EAADs类脂质材料的合成及结构表征17-29
• 1 实验材料和仪器17-18
• 1.1 实验材料17-18
• 1.2 实验仪器18
• 2 实验方法18-20
• 2.1 EAADs-1 的合成18-19
• 2.2 EAADs-2 的合成19
• 2.3 EAADs-3 的合成19-20
• 2.4 EGFR mAb的巯基化20
• 3 实验结果20-28
• 3.1 EAADs-1 的结构表征20-25
• 3.2 EAADs-2 的结构表征25-27
• 3.3 EAADs-3 的结构表征27-28
• 4 本章小结28-29
• 第三章EAADs类脂质体的制备及评价29-44
• 1 实验材料和仪器29
• 1.1 实验材料29
• 1.2 实验仪器29
• 2 实验方法29-34
• 2.1 EAADs类脂质体的制备29-31
• 2.2 EAADs类脂质体的表征31-32
• 2.3 喷雾冷冻干燥法制备干粉吸入剂32-33
• 2.4 干粉吸入剂理化性质的评价33-34
• 3 实验结果34-43
• 3.1 EAADs类脂质体制备处方的优化34-36
• 3.2 EAADs类脂质体理化性质的评价36-39
• 3.3 干粉吸入剂理化性质的评价39-43
• 4 本章小结43-44
• 第四章EAADs类脂质体细胞学评价44-65
• 1 实验材料和仪器44-45
• 1.1 实验材料44-45
• 1.2 实验仪器45
• 2 实验方法45-50
• 2.1 细胞培养45-46
• 2.2 EAADs类脂质体安全性的考察46
• 2.3 EAADs类脂质体在A549/DDP细胞中的摄取46
• 2.4 EAADs-3 类脂质体在A549/DDP细胞中的分布46-47
• 2.5 EAADs-3 类脂质体在A549/DDP-Raw 264.7 共培养体系中的分布47
• 2.6 高沉默效率Survivin siRNA和MRP1 siRNA序列的筛选47-48
• 2.7 Survivin siRNA（或MRP1 siRNA）对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响48-49
• 2.8 Survivin siRNA对A549/DDP细胞凋亡的影响49
• 2.9 Survivin siRNA对A549/DDP细胞周期的影响49
• 2.10 Survivin siRNA（或MRP1 siRNA）对A549/DDP中相关蛋白表达的影响 . 39 2.11 Survivin siRNA与MRP1 siRNA协同作用的考察49-50
• 2.11 Survivin si RNA 与 MRP1 si RNA 协同作用的考察50
• 2.12 数据分析50
• 3 实验结果50-64
• 3.1 EAADs类脂质体安全性的评价50-51
• 3.2 EAADs类脂质体在A549/DDP细胞中的摄取51-54
• 3.3 EAADs-3 类脂质体在A549/DDP细胞中的分布54-55
• 3.4 EAADs-3 类脂质体在A549/DDP-Raw 264.7 共培养体系中的分布55-57
• 3.5 高沉默效率Survivin siRNA和MRP1 siRNA序列的筛选57-58
• 3.6 Survivin siRNA（或MRP1 siRNA）对A549/DDP顺铂敏感性的影响58-59
• 3.7 Survivin siRNA对A549/DDP细胞凋亡的影响59-60
• 3.8 Survivin siRNA对A549/DDP细胞周期的影响60-61
• 3.9 Survivin siRNA对A549/DDP细胞中Survivin蛋白表达的影响61-62
• 3.10 MRP1 siRNA对A549/DDP细胞中MRP1 蛋白表达的影响62-63
• 3.11 Survivin siRNA与MRP1 siRNA协同作用的考察63-64
• 4 本章小结64-65
• 第五章EAADs类脂质体体内组织分布及药效学评价65-74
• 1 实验材料和仪器65
• 1.1 实验材料65
• 1.2 实验仪器65
• 2 实验方法65-67
• 2.1 组织分布65-66
• 2.2 药效学评价66
• 2.3 评价指标66-67
• 3 实验结果67-73
• 3.1 组织分布67-69
• 3.2 药效学评价69-73
• 4 本章小结73-74
• 全文总结74-76
• 参考文献76-83
• 攻读硕士学位期间科研成果83-84
• 致谢84-85

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 邹文;胡铁辉;;NSCLC细胞株A549和巨噬细胞株U937共培养对IL-8促表达和分泌的作用[J];中华肿瘤防治杂志;2007年14期

2 方翔;曹以诚;杜正平;郭旭;卓敏;;siRNA理性设计原理分析[J];生命的化学;2007年04期

3 侯俊娜;罗益锋;王杜娟;杨惠玲;郭禹标;;siRNA沉默MIF基因抑制大细胞肺癌H460细胞增殖[J];中国病理生理杂志;2011年05期

4 白春学;张新;;肺癌的治疗现状[J];中华结核和呼吸杂志;2006年03期

5 杨丽娟;杨婷;姜娟;徐振中;王坚成;张强;;PEG修饰阳离子脂质体对siRNA转染效果的影响(英文)[J];Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences;2009年03期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 刘薇;递送siRNA的EGFR靶向免疫脂质体的制备及其体内外活性研究[D];第二军医大学;2011年

2 崔婷婷;靶向MRP1基因RNAi逆转肺癌A549/DDP细胞多药耐药研究[D];齐齐哈尔大学;2011年

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本文编号：286292