自组装透明质酸纳米粒作为天冬酰胺酶运送载体的研究

发布时间：2017-05-03 23:05

  本文关键词：自组装透明质酸纳米粒作为天冬酰胺酶运送载体的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：蛋白质和多肽药物是生物大分子,在临床使用的过程中非常容易变性导致失活。因此,应用药物载体或运输系统提高其稳定性就显得非常有必要。药物运载体在提高药物的稳定性疗效方面有许多优点,例如,可以提高蛋白质／多肽在水溶液中的稳定性；控制蛋白质／多肽分子的释放,以持续的缓释避免突释带来的副作用。透明质酸(HA),是一种高分子(105-107Da)天然粘多糖,广泛存在于体液和组织中。由于生物可降解性、低的免疫原性,HA是作为药物缓释载体的理想材料。天冬酰胺酶是治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)和其它造血系统恶性肿瘤的药物。天冬酰胺酶能够催化天冬酰胺转化为天冬氨酸和氨。然而作为一种外源蛋白,天冬酰胺酶在临床使用中会过早失活、被快速清除,需要反复注射来维持治疗水平,导致免疫应答反应。因此,可以通过将天冬酰胺酶包埋入载体来增长酶在血液循环中的半衰期。采取活性酯法制备脱氧胆酸酸化透明质酸,通过控制脱氧胆酸的加入量制得不同取代度的HD耦合物。随着HD耦合物中氨基化脱氧胆酸的增加,取代度增加,耦合物的平均分子量也相应的增加。应用超声法制备自组装纳米粒悬液,用动态光散射仪进行了粒径大小和粒度分布检测,发现不同取代度HD耦合物超声得到的纳米粒径数值也不同。Zeta电位是表征表面电荷的重要指标,取代度不同的HD纳米耦合物Zeta数值均为负值,并且相差不大。随后检测稀释浓度、储存时间、外界环境pH、离子强度和疏水强度等不同条件对HD耦合物稳定性有一定的影响。将天冬酰胺酶包载于纳米粒中,测试了HD纳米粒包载药物天冬酰胺酶的载药量和包封率,随着天冬酰胺酶加入量的增加,HD耦合物纳米溶液的载药量增加,包封率降低。通过对天冬酰胺酶体外释放的研究,得出取代度越大,药物释放越缓慢,缓释效果越好。验证了不同离子强度对HD纳米粒载药量的影响,说明纳米粒和酶分子之间存在着疏水相互作用。对所使用材料的血液相容性做了测试,证明材料生物相容性好。通过对比天冬酰胺酶和自组装纳米粒天冬酰胺酶复合物酶的酶活力性质的差别,探究了不同反应温度和不同酸碱度对复合酶和天然酶的影响,复合酶活力回收率为83.10%。测试了酶的动力学参数,用双倒数法得到酶的米氏常数,复合酶对底物天冬酰胺的亲和能力提高,水解底物天冬酰胺的活力增加。
【关键词】：自组装透明质酸 纳米运载体 天冬酰胺酶
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 前言13-29
• 1 蛋白质药物的应用现状及存在的问题13-14
• 1.1 分类13
• 1.2 应用现状13
• 1.3 存在问题13-14
• 2 药物载体14-19
• 2.1 脂质体蛋白质药物载体15-16
• 2.2 微球蛋白质药物载体16-17
• 2.3 纳米球蛋白质药物载体17-19
• 3 透明质酸(HA)19-24
• 3.1 透明质酸做药物载体的给药途径20-23
• 3.2 透明质酸纳米粒的应用及研究现状23-24
• 4 天冬酰胺酶24-27
• 4.1 天冬酰胺酶简介24-25
• 4.2 天冬酰胺酶的临床应用及现状25-27
• 5 研究依据及内容27-29
• 5.1 研究依据27
• 5.2 研究内容27-28
• 5.3 技术路线28-29
• 第一章 自组装透明质酸纳米粒的制备及影响材料稳定性因素的研究29-42
• 引言29-30
• 1 材料30-31
• 1.1 药品与试剂30
• 1.2 主要仪器、设备30-31
• 2 方法31-34
• 2.1 疏水化透明质酸的制备31-32
• 2.2 取代度的测定32
• 2.3 粒径大小及粒径分布的测定32
• 2.4 Zeta电位的测定32
• 2.5 原子力显微镜的测定32
• 2.6 不同的稀释浓度对材料稳定性的影响32-33
• 2.7 不同的储存时间对材料稳定性的影响33
• 2.8 不同的pH对材料稳定性的影响33
• 2.9 不同浓度的NaCl溶液对材料稳定性的影响33
• 2.10 不同浓度的尿素溶液对材料稳定性的影响33-34
• 3 结果与讨论34-41
• 3.1 取代度的测定结果34
• 3.2 粒径大小及Zeta电位测定结果34-35
• 3.3 原子力显微镜测定结果35
• 3.4 不同的稀释浓度对材料稳定性的影响35-36
• 3.5 不同的储存时间对材料稳定性的影响36-37
• 3.6 不同的pH对材料稳定性的影响37-38
• 3.7 不同浓度的NaCl溶液对材料稳定性的影响38-39
• 3.8 不同浓度的尿素溶液对材料稳定性的影响39-41
• 4 小结41-42
• 第二章 自组装纳米粒作为天冬酰胺酶药物运载体的研究42-51
• 引言42
• 1 材料42-44
• 1.1 主要药品、试剂42-43
• 1.2 主要仪器设备43-44
• 2 方法44-46
• 2.1 HD纳米粒包载天冬酰胺酶的载药量与包封率44-45
• 2.2 天冬酰胺酶体外释放45
• 2.3 不同离子强度对载药量的影响45
• 2.4 不同浓度的尿素溶液对载药量的影响45
• 2.5 血液相容性检测45-46
• 3 结果与讨论46-49
• 3.1 HD纳米粒包载天冬酰胺酶的载药量与包封率46-47
• 3.2 天冬酰胺酶的体外释放研究47-48
• 3.3 不同离子强度对载药量的影响48
• 3.4 不同浓度的尿素溶液对载药量的影响48-49
• 3.5 血液相容性检测49
• 4 小结49-51
• 第三章 复合酶与天然酶酶学性质的研究51-60
• 引言51
• 1 材料51-53
• 1.1 主要药品、试剂51-52
• 1.2 主要仪器设备52-53
• 2 方法53-56
• 2.1 天冬酰胺酶的活力测定53-55
• 2.2 米氏常数测定55
• 2.3 酶的活力影响因素研究55-56
• 2.4 血浆中酶的稳定性56
• 3 结果与讨论56-59
• 3.1 酶的活力回收率56
• 3.2 米氏常数测定56-57
• 3.3 天冬酰胺酶的活力影响因素研究57-59
• 3.4 血浆中天然酶与复合酶的稳定性59
• 4 小结59-60
• 全文总结60-61
• 主要创新点61-62
• 参考文献62-68
• 致谢68-69
• 附录169-70
• 附录270

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