Thiocoraline的抗肿瘤活性及其耐药机制研究

发布时间：2024-02-19 13:25

　　不良的药代动力学特征,药物的毒副作用,特别是药物耐药性的出现,使化疗药物在临床肿瘤治疗中的效果大幅降低。而海洋复杂多变的生存环境,赋予了生活在其中的生物特殊的抵御手段,这些化学或者生物适应产生了许多具有特殊生物活性和潜在抗肿瘤效应的化合物。Thiocoraline即噻可拉林,为含硫缩肽,是一种DNA双嵌插剂,最初是从海洋单胞菌Micromonospora marina中分离得到,在抗癌活性方面有很好的效果。本课题以thiocoraline为研究对象,研究thiocoraline抗肿瘤活性及乳腺癌对thiocoraline产生耐药的分子机制。使用MTT法检测thiocoraline对MCF-7细胞,L-02细胞的毒性作用;利用MTT法和结晶紫染色比较thiocoraline和doxorubicin对MCF-7细胞的作用效果;流式细胞术检测thiocoraline对细胞周期的影响;Hoechst 33342和Western Blot检测thiocoraline诱导细胞凋亡情况;通过浓度梯度递增法培养得到对thiocoraline耐药的MCF-7/T细胞株,并确定其耐药指数。利用生长曲线和克...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 肿瘤
    1.2 DNA嵌插剂与肿瘤治疗
    1.3 Thiocoraline的研究进展
    1.4 肿瘤多药耐药及其发生机制
        1.4.1 膜蛋白外排泵介导细胞耐药
        1.4.2 细胞内相关酶介导耐药
        1.4.3 信号通路异常介导的耐药
        1.4.4 细胞凋亡介导耐药
    1.5 本课题研究内容及意义
第二章 Thiocoraline的抗肿瘤活性研究
    2.1 材料
        2.1.1 实验药物
        2.1.2 细胞株
    2.2 主要试剂与仪器
        2.2.1 试剂
        2.2.2 仪器
    2.3 主要溶液的配制
        2.3.1 PBS磷酸盐缓冲液(1×)
        2.3.2 5mg/mLMTT溶液
        2.3.3 2%结晶紫溶液
        2.3.4 PBST(1×)
        2.3.5 10%(w/v)过硫酸铵(APS)溶液
        2.3.6 10%(w/v)十二烷基硫酸钠(SDS)溶液
        2.3.7 Tris-甘氨酸电泳缓冲液(1×)
        2.3.8 Tris-甘氨酸电转缓冲液(1×)
        2.3.9 细胞培养基
        2.3.10 Thiocoraline母液配制
        2.3.11 Doxorubicin母液配制
    2.4 实验方法
        2.4.1 细胞培养
        2.4.2 MTT法检测thiocoraline对MCF-7细胞,L-02细胞的毒性作用
        2.4.3 结晶紫染色比较thiocoraline和doxorubicin对MCF-7细胞的作用效果
        2.4.4 流式细胞术检测thiocoraline对细胞周期的影响
        2.4.5 Hoechst33342检测细胞凋亡
        2.4.6 WesternBlot分析thiocoraline诱导细胞凋亡的作用机制
        2.4.7 统计学分析
    2.5 实验结果
        2.5.1 MTT法检测thiocoraline对MCF-7细胞的毒性作用
        2.5.2 Thiocoraline作用于MCF-7细胞的半抑制有效浓度的测定
        2.5.3 Thiocoraline安全性效果评价
        2.5.4 MTT法检测doxorubicin对MCF-7细胞的毒性作用
        2.5.5 Doxorubicin作用于MCF-7细胞的半抑制有效浓度的测定
        2.5.6 结晶紫染色法比较thiocoraline,doxorubicin对MCF-7细胞的毒性作用
        2.5.7 细胞周期检测
        2.5.8 Hoechst33342检测细胞凋亡
        2.5.9 Thiocoraline通过Caspase通路诱导MCF-7细胞凋亡
    2.6 总结与讨论
第三章 MCF-7细胞对thiocoraline耐药机制的研究
    3.1 材料
        3.1.1 实验药物
        3.1.2 细胞株
    3.2 主要试剂与仪器
        3.2.1 试剂
        3.2.2 仪器
    3.3 主要溶液的配制
        3.3.1 LB液体培养基
        3.3.2 TAE(50×)
        3.3.3 MK-2206HCl母液配制
    3.4 实验方法
        3.4.1 细胞培养
        3.4.2 Thiocoraline耐药株MCF-7/T的构建
        3.4.3 MCF-7/Akt1高表达株的构建
        3.4.4 细胞生长曲线测定
        3.4.5 克隆形成能力检测
        3.4.6 MTT法测定细胞活性
        3.4.7 Trizol法提取总RNA
        3.4.8 半定量RT-PCR检测乳腺癌耐药相关蛋白的表达水平
        3.4.9 qPCR检测乳腺癌耐药相关蛋白的表达水平
        3.4.10 WesternBlot检测蛋白表达水平
        3.4.11 统计学分析
    3.5 实验结果
        3.5.1 MCF-7/T的耐药指数
        3.5.2 MCF-7/T与MCF-7细胞生物学特征比较
        3.5.3 半定量RT-PCR初步检测乳腺癌相关耐药蛋白的表达水平
        3.5.4 qPCR及WesternBlot检测MCF-7/T耐药细胞内蛋白水平变化
        3.5.5 Thiocoraline作用MCF-7细胞72h后相关蛋白水平的分析
        3.5.6 MCF-7细胞内Akt的磷酸化水平提高及其对thiocoraline敏感性的分析
        3.5.7 抑制MCF-7细胞内Akt磷酸化水平及其对thiocoraline敏感性分析
        3.5.8 抑制耐药株MCF-7/T细胞内Akt磷酸化水平及其对thiocoraline敏感性分析
    3.6 总结与讨论
结论
参考文献
硕士期间已发表论文
致谢



本文编号：3902758