孕哺期暴露邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯对仔鼠肾脏EMT的影响

发布时间：2023-09-03 17:49

　　目的:本研究建立雌性大鼠妊娠期及哺乳期暴露邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)模型,探讨暴露DEHP是否诱导仔鼠肾脏发生上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT);采用大鼠肾小管近端上皮细胞系NRK52E来研究DEHP暴露对肾脏发生EMT的影响,以及Wnt/β-catenin信号通路在其中的调控作用。实验方法:采用8-10周龄、体重为230-250g的健康Wistar大鼠,适应性喂养后根据体重随机分组,分别为对照组、低剂量DEHP暴露组(30mg/kg/d)、中剂量DEHP暴露组(300 m g/kg/d)以及高剂量DEHP暴露组(750mg/kg/d),每个剂量组中有孕鼠14-16只。在仔鼠PN21时断乳,分笼饲养,各组均停止灌胃。选取PN28天仔鼠肾脏组织,Masson(Masson’striclhrome stain)染色以观察肾脏病理学变化;Western-Blot检测肾脏EMT进程。体外实验采用肾小管近端上皮细胞系NRK52E为研究对象,建立DEHP暴露模型。CCK-8...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 研究对象和分组
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 动物分组与DEHP暴露模型的建立
    2.3 Masson染色
    2.4 动物肾脏总蛋白提取和定量,Western-Blot检测
        2.4.1 蛋白提取和定量
        2.4.2 Western-Blot检测
    2.5 细胞培养
        2.5.1 细胞复苏
        2.5.2 细胞传代
        2.5.3 细胞冻存
        2.5.4 细胞活力测定
        2.5.5 细胞分组和处理
    2.6 细胞总蛋白的提取、定量和检测
    2.7 细胞免疫荧光
    2.8 统计分析
3 结果
    3.1 孕哺期母体DEHP暴露所致仔鼠肾脏形态学改变
    3.2 孕哺期母体DEHP暴露诱导仔鼠肾脏发生EMT
    3.3 DEHP暴露对NRK52E细胞活力的影响
    3.4 DEHP暴露诱导NEK52E发生EMT
    3.5 DEHP暴露激活Wnt/β-catenin通路信号
    3.6 Wnt/β-catenin Agonist1通过激活Wnt/β-cate nin通路促进DEHP暴露后EMT的发生
    3.7 IWR-1通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制DEHP暴露后EMT的发生
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述 环境内分泌干扰物暴露对肾脏的影响研究进展
    参考文献
实践报告
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3845501