质谱联用技术的紫杉醇分析方法及其临床应用的研究

发布时间：2016-10-26 18:54

  本文关键词：紫杉醇细胞内药代动力学及紫杉醇类药物质谱裂解规律研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《复旦大学》 2012年

基于液相色谱—质谱联用技术的紫杉醇分析方法及其临床应用的研究

钱隽  

【摘要】：紫杉醇是临床上常用的紫杉烷类抗癌药物。然而,紫杉烷类药物具有强疏水性,临床使用时需用多种药用溶媒增溶,使药物的疗效和安全性受到影响。开发高效低毒的紫杉醇新型制剂已成为近年来国内外研究的热点,由此也引发了对于紫杉醇在定性、定量测定以及代谢物分析等方面的各种需求。 本课题分别以液相色谱-质谱联用(LC-MS)和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)为技术平台,对人血浆中紫杉醇的分析方法进行了研究。经方法优化,建立了灵敏度高、特异性好的定量分析方法,并进行了方法验证。 LC-MS法采用液液萃取法进行血浆样品预处理,提取液为叔丁基甲醚,内标选用炔诺酮。色谱柱为Zorbax SB-C18柱(100mm×2.1mm,3.5μm, Agilent),流动相为甲醇-0.2mmol/L甲酸铵溶液(包含0.1%甲酸),梯度洗脱。在ESI源正离子模式下,选择离子监测(SIM)的目标离子为紫杉醇的[M+Na]+m/z876.5和内标的[M+H]+m/z299.4。方法学验证表明本方法的灵敏度高、特异性好,线性范围是1.0-400ng/mL(r0.998),最低定量限为1.0ng/mL,无明显基质效应,方法的日内和日间精密度都小于8.8%,准确度在±6.8%以内,可以满足药代动力学研究的要求。此方法已成功应用于紫杉醇脂质体注射液在患者体内的药动学研究。 LC-MS/MS法定量方法中内标选用多西紫杉醇,色谱柱为Shimpack XR-ODS柱(75mm x3.0mm,2.2μm, Shimadzu),流动相为甲醇：1.0mmol/L甲酸铵溶液(73/27,v/v),等度洗脱。在ESI源正离子模式下,多反应监测(MRM)的离子对为紫杉醇m/z854.2→286.1和内标m/z808.2→226.0。线性范围是0.5-500ng/mL,方法的日内和日间精密度都小于7.5%,准确度在±3.6%以内。该方法血浆用量少(50μL),灵敏度高,最低定量限达0.5ng/mL,分析周期为4min,适用于快速以及大样本量的分析,并在注射用紫杉醇聚合物胶束的一期临床试验中取得满意的结果。 研究中对色谱和质谱条件进行了细致优化,并且通过在溶液中加入不同的添加剂研究紫杉醇的离子化方式以及加合物离子的形成,有助于提高紫杉醇的离子化效率和质谱响应的稳定性,满足痕量测定的需求。 通过系统研究紫杉醇在电喷雾一级质谱的电离规律和二级质谱的裂解规律,总结出紫杉醇质谱行为的特点,阐明了紫杉醇的裂解过程及特征性碎片离子,并推测受试者体内主要代谢产物的结构和可能的代谢途径,从而为定性鉴别和定量分析提供可靠的理论依据,为其药物代谢过程的研究奠定基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R917
【目录】：

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