核苷类抗生素Capuramycin与Albomycin结构的优化

发布时间：2017-05-14 14:11

  本文关键词：核苷类抗生素Capuramycin与Albomycin结构的优化，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的1对己内酰胺环进行替换和改造,获得Capuramycin同系物,以期产生具更高成药价值的前体化合物;阐明负责内酰胺环连接的酶的催化机制,为未来以组合生物合成的方式构建“非天然Capuramycin同系物库”提供有益信息。2获得的Albomycin生物合成信息,为此类化合物生物合成模式的建立提供依据;研究负责铁色素生物合成及耦合的酶,阐明其作用机制,为应用基因工程、组合生物合成、以及半合成等策略建立一个“高铁霉素”同系物库提供依据。方法1目的基因的灭活与互补,微生物发酵,A-503083F的分离纯化,原生质体转化,蛋白的异源表达及分离纯化,体外酶催化,HPLC检测酶活。2微生物发酵,目的基因的灭活与互补,Albomycin铁色素的分离纯化及鉴定,原生质体转化,铁色素的异源表达及分离纯化,HPLC检测。结果1运用基因敲除及组合生物学的技术手段成功获得Capuramycin A-503083F的生产菌株;依据Capuramycin的化学结构,采用底物添加等手段优化发酵条件,并采用SP-207、HW-40F及HPLC联用分离纯化获得了503083F纯品;对目的基因进行异源表达,并将目的产物进行体外酶催化,对催化反应进行HPLC分析,已确证反应发生。2依据Albomycin生物合成信息,分离纯化获得了Albomycin的铁色素部分,为组合生物合成Albomycin铁色素作标准品对照。运用基因敲除及组合生物学的技术手段,对铁色素生物合成基因簇进行异源表达,采用底物添加及调PH值等手段优化了工程菌株发酵条件,为构建铁色素生物合成体系奠定基础。结论1在发酵过程中采取底物添加及调PH值等手段可优化菌株发酵条件。2采用宿主S.lividans TK-64可进行Cap W和Albomycin铁色素的异源表达。3本研究初步阐明负责内酰胺环连接的酶的催化机制,并通过体外酶催化反应获得Capuramycin同系物,证明了体外构建“非天然Capuramycin同系物库”的可能性。4初步获得的Albomycin铁色素生物合成信息,为构建“高铁霉素”同系物库提供有益信息。
【关键词】：Capuramycin 内酰胺环 CapW 生物合成 Albomycin 铁色素
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R914.5
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 引言10-14
• 第1章 新一代抗结核先导化合物Capuramycin内酰胺环的生物方法改良14-33
• 1.1 材料与方法14-23
• 1.1.1 材料14-19
• 1.1.2 方法19-23
• 1.2 结果23-26
• 1.2.1 突变株的获得23
• 1.2.2 野生株与突变株的HPLC结果对照23
• 1.2.3 对分离纯化的发酵产物进行HPLC分析23-24
• 1.2.4 将半制备收集液作质谱图进行结构确证24
• 1.2.5 CapW的异源表达与分离纯化融合蛋白的SDS-PAGE分析24-25
• 1.2.6 Capuramycin同系物的酶促合成HPLC分析25
• 1.2.7 对半制备收集液进行质谱分析25-26
• 1.3 讨论26-31
• 1.3.1 由capU突变株富集 503083F的机制分析26-27
• 1.3.2 突变菌株的获得27
• 1.3.3 发酵条件的优化27
• 1.3.4 使用大孔吸附树脂分离纯化 503083F27-28
• 1.3.5 使用分子筛HW-40F进一步分离纯化 503083F28
• 1.3.6 冷冻干燥机干燥的必要性分析28
• 1.3.7 对分离纯化的发酵产物进行HPLC分析28-29
• 1.3.8 将收集液作质谱图进行结构确证29
• 1.3.9 CapW的异源表达29
• 1.3.10 Capuramycin同系物的体外酶促合成进行HPLC分析29
• 1.3.11 对半制备收集液进行质谱分析29-30
• 1.3.12 展望30-31
• 1.4 本章小结31
• 参考文献31-33
• 第2章 “高铁霉素”家族中典型代表Albomycin铁色素的生物方法改良33-44
• 2.1 材料与方法33-37
• 2.1.1 材料33-34
• 2.1.2 方法34-37
• 2.2 结果37-38
• 2.2.1 已获得的Albomycin生物合成相关信息37
• 2.2.2 对分离纯化的发酵产物进行HPLC分析37-38
• 2.2.3 对HPLC制备的发酵产物进行紫外光谱分析38
• 2.2.4 对HPLC制备的发酵产物进行质谱分析38
• 2.3 讨论38-41
• 2.3.1 Albomycin生物合成相关信息分析38-39
• 2.3.2 使用大孔吸附树脂分离纯化Albomycin铁色素39
• 2.3.3 使用分子筛葡聚糖凝胶Bio Gel P-2 对Albomycin铁色素的进一步纯化39
• 2.3.4 对分离纯化的发酵产物进行HPLC分析39-40
• 2.3.5 对分离纯化的发酵产物进行光谱分析40
• 2.3.6 对HPLC制备的发酵产物进行质谱确证40
• 2.3.7 展望40-41
• 2.4 本章小结41
• 参考文献41-44
• 第3章 综述 MraY转位酶抑制剂——一类新型的抗菌药物44-65
• 3.1 肽聚糖的生物合成44-46
• 3.2 筛选新型抗菌药物的重要靶点——MraY转位酶46-47
• 3.3 MraY转位酶抑制剂47-58
• 3.3.1 核苷类抗生素48-57
• 3.3.2 其他抑制剂57-58
• 3.4 结论和展望58-59
• 参考文献59-65
• 结论65-66
• 致谢66-67
• 导师简介67-68
• 作者简介68-69
• 学位论文数据集69

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1 刘娟娟;核苷类抗生素Capuramycin与Albomycin结构的优化[D];华北理工大学;2015年

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本文编号：365416