哈尔满的体内外代谢与药代动力学研究

发布时间：2017-05-14 10:17

  本文关键词：哈尔满的体内外代谢与药代动力学研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:骆驼蓬总生物碱中的哈尔满碱是治疗阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)的潜在药物,因此在前期研究的基础上进行哈尔满生物碱在大鼠的体内外代谢与药代动力学研究。方法:1)采用差速离心法制备大鼠肝微粒体,并对所制备的大鼠肝微粒体进行蛋白含量测定。2)采用UPLC-ESI-MS/MS法同时测定9种探针代谢产物的浓度,对大鼠肝微粒体中9种细胞色素P450酶的活性进行标定,并对大鼠肝微粒体中9种细胞色素P450亚型酶的代谢动力学进行了研究。3)采用UPLC-ESI-MS/MS法,对大鼠肝微粒体中II相葡萄糖醛酸转移酶的活性进行标定。4)采用超高效液相串联飞行时间质谱仪,对哈尔满生物碱在大鼠肝微粒体及肝S9中的I、II相代谢产物进行鉴定与研究。5)采用超高效液相串联飞行时间质谱仪,对哈尔满生物碱在大鼠体内的代谢产物进行鉴定与研究。6)采用UPLC-ESI-MS/MS法,对哈尔满生物碱及其代谢产物在大鼠体内的药代动力学进行研究。结果:1)采用差速离心法,经过匀浆、两次离心及洗涤,成功制备得到了大鼠肝微粒体。经计算,所得的大鼠肝微粒体的得率为32mg microsome protein/g liver。2)在优化的色谱及质谱条件下,对9种细胞色素P450酶催化产生的探针代谢产物进行了分析与测定,实验结果表明大鼠肝微粒体内没有CYP2A6亚型酶的活性。此外,在对大鼠肝微粒体中9种细胞色素P450亚型酶的代谢动力学的研究中,采用GraphPad(Prism 5)进行数据拟合后,计算得到各亚型酶催化探针反应的动力学参数Km和Vmax值及其酶促动力学曲线。根据Eadie-Hofstee作图,可以得出,CYP3A4催化的睾酮羟基化符合希尔方程描述的动力学特征,而其他7种亚型酶催化的反应均符合米氏方程所描述的典型的酶促反应动力学特征。3)在优化的色谱及质谱条件下,我们对大鼠肝微粒体内II相代谢酶UGT2B7催化产生的探针代谢产物进行了分析与测定,结果表明本实验室所制备的大鼠肝微粒体具有UGT2B7亚型酶的活性。4)采用超高效液相串联飞行时间质谱仪,对哈尔满生物碱在大鼠肝微粒体及肝S9中的I、II相代谢产物进行鉴定与研究,研究结果显示,一共鉴定了9个体外代谢产物,其中包括4个I相代谢产物,5个II相代谢产物(3个葡萄糖醛酸化物和2个硫酸化物)。5)采用超高效液相串联飞行时间质谱仪,对哈尔满生物碱在大鼠体内的I、II相代谢产物进行鉴定与研究,研究结果显示,一共鉴定了20个体内代谢产物,其中尿液中11个代谢产物,粪便中16个代谢产物,胆汁中16个代谢产物以及血浆中10个代谢产物;此外,结果还显示胆汁和粪便清除是主要的排泄途径。6)哈尔满生物碱及其代谢产物在大鼠体内的药代动力学研究结果表明,在静脉(1.0mg/kg)和口服(30.0mg/kg)给予哈尔满生物碱后,哈尔满及其10个代谢产物同时被检测。本研究中,通过半定量方法计算代谢产物的浓度,成功计算得到哈尔满及其10个代谢产物的药时曲线及药代动力学参数。此外,计算所得哈尔满的绝对生物利用度为19.41%。研究还结果表明,硫酸化是哈尔满生物碱在大鼠体内的主要代谢途径。结论:通过数据整合与代谢轮廓分析,推测得到了哈尔满生物碱在大鼠的体内外过程与代谢途径,体内外一共鉴定了21个哈尔满碱的代谢产物(I相和II相),并了解了哈尔满生物碱及其10个代谢产物在大鼠体内的药代动力学过程。
【关键词】：哈尔满 大鼠肝微粒体 代谢 药代动力学
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 研究内容15-87
• 1 大鼠肝微粒体的制备及蛋白含量的测定15-18
• 1.1 仪器与试药15-16
• 1.2 方法与结果16-17
• 1.3 讨论17-18
• 2 大鼠肝微粒体中细胞色素P450酶的反应表征及活性标定18-28
• 2.1 仪器与试药19
• 2.2 方法与结果19-23
• 2.3 讨论23-28
• 3 大鼠肝微粒体中葡萄糖醛酸转移酶的反应表征及活性标定28-31
• 3.1 仪器与试药28-29
• 3.2 方法与结果29-30
• 3.3 讨论30-31
• 4 大鼠肝微粒体及肝S9中哈尔满生物碱代谢产物的鉴定31-48
• 4.1 仪器与试药31-32
• 4.2 方法与结果32-47
• 4.3 讨论47-48
• 5 哈尔满生物碱在大鼠体内代谢产物的鉴定48-65
• 5.1 仪器与试药48-49
• 5.2 方法与结果49-64
• 5.3 讨论64-65
• 6 哈尔满生物碱在大鼠体内的药代动力学研究65-87
• 6.1 仪器与试药65-66
• 6.2 方法与结果66-81
• 6.3 讨论81-87
• 小结87-88
• 致谢88-89
• 参考文献89-96
• 综述96-132
• 参考文献114-132
• 攻读硕士学位期间发表的学位论文132-133
• 导师评阅表133

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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2 李婷婷;;何首乌对增强青少年记忆、抗疲劳作用进行研究的文献再评价[J];中外医疗;2011年14期

3 罗红波;杨金升;石向群;李芸;杨期东;张志强;尹榕;;Aβ诱导内质网应激性凋亡通路的启动及二苯乙烯苷的影响[J];东南大学学报(医学版);2011年06期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 鲍娟;GGA诱导AD大鼠海马HSP70表达及其抗细胞凋亡机制的研究[D];中南大学;2008年

2 罗红波;二苯乙烯苷对AD鼠内质网应激的影响及机制研究[D];中南大学;2008年

3 路艳;补肾法对骨髓抑制模型骨髓干细胞的调控机理研究[D];广州中医药大学;2012年

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本文编号：364915