庆大霉素、奈替米星引起肾毒性早期生物标志物的比较研究

发布时间：2017-05-28 03:06

  本文关键词：庆大霉素、奈替米星引起肾毒性早期生物标志物的比较研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：体外试验：研究庆大霉素、奈替米星对体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）的毒性作用，及急性肾损伤标志物表达与分泌的特点。 体内试验：研究庆大霉素诱导的SD大鼠急性肾损伤模型中血液、尿液生物标志物表达与分泌的特点。 通过以上方法的建立，并对上市药进行评价验证，建立对新化合物的肾毒性评价体系，对创新药研发早期的毒性评价提供科学依据。 方法：体外试验：采用不同浓度的庆大霉素和奈替米星作用于体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2），通过MTT法检测药物对HK-2细胞的增值抑制作用、ELISA法检测细胞上清液中KIM-1和NGAL的分泌与表达。 体内试验：采用连续7天给予庆大霉素（设50mg/kg和100mg/kg两个剂量组），建立SD大鼠的急性肾损伤模型，同时设正常对照组（给予等体积的0.9%NaCl注射液）。利用全自动生化分析仪测定血清中肌酐（CRE）和尿素（UREA）的浓度，ELISA法检测血液中Cys C、β2-MG、NGAL和尿液中的KIM-1、NGAL、IL-18、Cys C、β2-MG的分泌与表达。 结果：体外试验：庆大霉素和奈替米星对体外培养的HK-2细胞均具有增殖抑制作用，其IC50分别为2.473±0.058mg/ml和5.277±0.125mg/ml；在HK-2细胞发生损伤后的短时间内，细胞上清液中KIM-1和NGAL的浓度会显著升高，不同的是KIM-1的浓度升高后会渐渐下降，而NGAL的浓度会维持在较高水平。 体内试验：1、肾脏组织病理学检查显示，在给予庆大霉素后的第2天，50mg/kg组、100mg/kg组肾脏无明显病理变化，第4天，50mg/kg组可见少量上皮细胞受损，，100mg/kg组比50mg/kg组受损严重，第8天，50mg/kg组上皮细胞受损比较严重，100mg/kg组大量上皮细胞严重受损。2、在给予庆大霉素后的第8天，100mg/kg组血清中肌酐、尿素、β2-MG的浓度与0.9%NaCl组（正常对照组）相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）；但两个模型组血清中NGAL和Cys C的浓度与0.9%NaCl组（正常对照组）相比，差异不具有统计学意义（P＞0.05）；但从给予庆大霉素后的第4天开始，100mg/kg组尿液中KIM-1、NGAL、IL-18、Cys C、β2-MG的含量与0.9%NaCl组（正常对照组）相比，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。 结论：体外试验表明，庆大霉素和奈替米星对体外培养的HK-2细胞均具有增殖抑制作用，且能够引起KIM-1和NGAL的异常表达和分泌。 体内试验表明，与血清肌酐、尿素和组织病理学检查相比，尿液中KIM-1、NGAL、IL-18、Cys C、β2-MG含量的变化能更早预测庆大霉素引起的肾损伤。
【关键词】：庆大霉素 奈替米星 肾毒性 生物标志物
【学位授予单位】：四川抗菌素工业研究所
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 英文缩写词表6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 第一部分：庆大霉素、奈替米星对体外培养 HK-2 细胞的增值抑制作用及细胞上清液中 KIM-1、NGAL 表达的影响16-30
• 1 MTT 法检测庆大霉素、奈替米星对体外培养 HK-2 细胞的增值抑制作用16-22
• 1.1 试验材料16-18
• 1.1.1 细胞株16
• 1.1.2 药品16-17
• 1.1.2.1 供试品Ⅰ16-17
• 1.1.2.2 供试品Ⅱ17
• 1.1.2.3 溶媒17
• 1.1.3 主要试剂17-18
• 1.1.4 主要仪器18
• 1.2 药物配制方法及浓度设置18-19
• 1.2.1 供试品Ⅰ的配制方法18
• 1.2.2 供试品Ⅱ的配制方法18
• 1.2.3 浓度设置18-19
• 1.3 试验方法19-20
• 1.3.1 细胞培养19
• 1.3.2 试验过程19-20
• 1.4 试验结果20-22
• 2 ELISA 法检测庆大霉素、奈替米星对体外培养 HK-2 细胞表达与分泌 KIM-1、NGAL 的影响22-30
• 2.1 试验材料22-24
• 2.1.1 细胞株22
• 2.1.2 药品22-23
• 2.1.2.1 供试品Ⅰ22-23
• 2.1.2.2 供试品Ⅱ23
• 2.1.2.3 溶媒23
• 2.1.3 主要试剂23
• 2.1.4 主要仪器23-24
• 2.2 药物配制方法及浓度设置24-25
• 2.2.1 供试品Ⅰ的配制方法24
• 2.2.2 供试品Ⅱ的配制方法24
• 2.2.3 浓度设置24-25
• 2.3 试验方法25-26
• 2.3.1 细胞培养25
• 2.3.2 试验过程25-26
• 2.4 试验结果26-30
• 2.4.1 不同浓度的庆大霉素、奈替米星对体外培养的 HK-2 细胞表达和分泌 KIM-1 的影响26
• 2.4.2 0.16mg/ml 庆大霉素、0.32mg/ml 奈替米星诱导体外培养的 HK-2 细胞表达和分泌 KIM-1 的量随时间的变化关系26-27
• 2.4.3 不同浓度的庆大霉素、奈替米星对体外培养的 HK-2 细胞表达和分泌 NGAL 的影响27
• 2.4.4 0.08mg/ml 庆大霉素、0.16mg/ml 奈替米星诱导体外培养的 HK-2 细胞表达和分泌 NGAL 的量随时间的变化关系27-30
• 第二部分：庆大霉素致 SD 大鼠肾毒性及生物标志物的比较研究30-41
• 1 试验材料30-32
• 1.1 试验动物30
• 1.2 药品30-31
• 1.2.1 供试品30-31
• 1.2.2 对照品31
• 1.2.3 溶媒31
• 1.3 主要试剂31-32
• 1.4 主要仪器32
• 2 药物配制方法32
• 3 试验方法32-35
• 3.1 动物分组及识别32-34
• 3.1.1 动物分组32-33
• 3.1.2 动物识别33-34
• 3.2 给药途径、方法、剂量、频度以及选择理由34
• 3.2.1 给药途径、方法、频度34
• 3.2.2 剂量设置及依据34
• 3.3 各种指标的检测频率和方法34-35
• 3.3.1 血液生物指标的检测34-35
• 3.3.2 尿液生物指标的检测35
• 3.3.3 肾脏组织病理学检查35
• 3.4 数据统计处理方法35
• 4 试验结果35-41
• 4.1 庆大霉素对 SD 大鼠血清中肌酐和尿素浓度的影响35-36
• 4.2 庆大霉素对 SD 大鼠血清中 NGAL、Cys C、β2-MG 浓度的影响36
• 4.3 庆大霉素对 SD 大鼠尿液中 NGAL、Cys C、β2-MG、IL-18、KIM-1 含量的影响36
• 4.4 肾脏组织病理学检查36-41
• 第三部分：试验结论及评价41-44
• 1 体外试验结果与讨论41
• 2 体内试验结果与讨论41-42
• 3 研究的创新点与讨论42-44
• 参考文献44-46
• 致谢46-47
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文47-48
• 综述48-54
• 参考文献53-54

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