小菜蛾抗菌肽的分离纯化及PLGA纳米载体给药

发布时间：2017-06-18 11:09

  本文关键词：小菜蛾抗菌肽的分离纯化及PLGA纳米载体给药，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：小菜蛾抗菌肽是一种相对分子质量为4500的α螺旋形的阳离子抗菌肽,实验室前期研究发现,CA具有较好的抗肝细胞癌活性,可能的机制是肝癌细胞因为磷脂酰丝氨酸,O型糖基化粘蛋白等负离子的过高表达导致肝癌细胞膜带有负电荷,CA能特异性与肝癌细胞膜结合,通过渗透作用和蛋白调节作用使细胞膜裂解和线粒体肿胀,从而导致细胞色素C释放和细胞的凋亡。CA的抗肝肿瘤活性显示出极好的高效低毒性。但CA易受温度pH等外界因素的影响而变性失活,也能发生自身聚集,或者与其他粒子无法逆转的结合而失去生物活性,所以其半衰期特别短,另外CA在小菜蛾幼虫体内的含量极低,提取纯化困难,两方面的因素极大的限制了CA的临床应用。本课题组拟用PLGA作为载体材料制备出CA的PLGA纳米粒,一方面解决CA在体内外不稳定性问题,提高CA在体内的半衰期。另一方面利用制备出的纳米粒本身大小的特点,实现纳米粒的被动靶向,增强CA的抗肝肿瘤效果。本文以课题已有的CA提取纯化工艺为基础,对提取纯化工艺进行优化。以降低纯化成本,提高纯化效率为目的,增加预纯化处理过程,并对预纯化中的重要工艺参数进行了正交优化。结果显示,经预纯化处理后,纯化周期大大缩短和纯化工艺中所用的树脂的量也大大减少,并且提高了单次提取物的处理量。经预纯化处理后,提取物中总多肽含量40%,且CA含量占总多肽的60%以上。抗肝肿瘤活性研究表明,该工艺条件对小菜蛾抗菌肽的生物活性影响较小。同时发现,小菜蛾中有一类具有抗肝癌活性的多肽,其中主要活性成分为小菜蛾抗菌肽CA。在预纯化工艺中,PBS溶液的使用,不仅避免了有机溶剂的残留问题,而且最大限度的降低了工艺成本,为抗菌肽的制剂研究和工艺产业化提供参考。纳米给药系统具有降低药物毒性和刺激性、延缓药物降解、延长药物释放时间、靶向释放等优点,将药物包封于其中,可实现调节药物释放速率,改变药物在体内的分布、提高药物生物利用度等目的,具有巨大的应用前景。因此,本文选用PLGA为载体材料,CA为模型药物,以改良后的S/W/O/W复乳-溶剂挥发法结合高压匀质法制备小菜蛾抗菌肽PLGA纳米粒(CA-PLGA-NPs),通过单因素实验和重要影响因素的正交试验,以2、6、14 d的累积释放率作为评价指标,对CA-PLGA-NPs的制备工艺进行优化和筛选,并对其粒径、多分散指数(PDI)、电位等理化性质进行表征,同时用透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)观察CA-PLGA-NPs的基本形态,并对其进行体外释药行为考察。理化性质研究结果表明,CA-PLGA-NPs呈球形或类球形,粒径、PDI、载药量、包封率分别为(358.76±22.51)nm、0.1681±0.0122、(10.50±0.28)%、(60.92±1.58)%。体外释放研究表明,CA-PLGA-NPs缓释性能良好,突释现象不明显,2-10d内达到释药稳定期,同时通过方程拟合发现,CA-PLGA-NPs与weibull方程拟合效果最好。本文以CA抗HepG2细胞生长的特性作为评价指标,采用对比实验评价CA-PLGA-NPs的制备工艺、载体材料和降解产物等参数对CA抗癌活性的影响。实验中使用不同时间段纳米粒的溶出液作为细胞实验用原料药,结果表明,载体材料及其降解产物对HepG2细胞的生长无抑制作用。(CA-PLGA-NPs的制备工艺、载体材料及其降解产物等参数对CA活性的影响不明显。
【关键词】：小菜蛾抗菌肽 CA-PLGA-NPs 体外释放 抗HepG2细胞活化
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943
【目录】：

• 中文摘要2-4
• ABSTRACT4-9
• 引言9-18
• 第一章 CA的提取纯化工艺研究18-29
• 1 仪器与材料18
• 2 方法18-28
• 2.1 提取纯化工艺研究18-20
• 2.2 小菜蛾总多肽含量测定20-22
• 2.3 小菜蛾抗菌肽含量测定方法的建立22-25
• 2.4 CA抗肝肿瘤细胞活性的研究25
• 2.5 提取分析与预纯化25-28
• 3 本章小结28-29
• 第二章 CA-PLGA-NPs制备工艺的研究29-44
• 1 仪器与材料29-30
• 2 方法30-38
• 2.1 CA-PLGA-NPs的制备30-31
• 2.2 CA-PLGA-NPs粒径和Zeta电位的测定31
• 2.3 CA-PLGA-NPs载药量和包封率的测定31-32
• 2.4 对照品溶液的制备32
• 2.5 供试品溶液的制备32
• 2.6 阴性对照溶液的制备32
• 2.7 专属性考察32-33
• 2.8 CA-PLGA-NPs的形态观察33
• 2.9 CA-PLGA-NPs的体外释放方法33
• 2.10 CA-PLGA-NPs的制备工艺因素考察33-38
• 2.11 CA-PLGA-NPs体外释药动力学38
• 2.12 CA-PLGA-NPs稳定性考察38
• 3 结果38-42
• 3.1 正交试验的优化结果38-39
• 3.2 工艺验证试验结果39
• 3.3 CA-PLGA-NPs的粒径和zeta电位测定结果39
• 3.4 CA-PLGA-NPs的包封率、载药量和体外释放39-40
• 3.5 CA-PLGA-NPs体外释放动力学40-41
• 3.6 CA-PLGA-NPs的形态观察41-42
• 3.7 CA-PLGA-NPs的稳定性考察42
• 4 本章小结42-44
• 第三章 CA-PLGA-NPs的体外抗HepG2细胞活性研究44-48
• 1 仪器与材料44
• 2 方法44-46
• 2.1 实验用药的制备44
• 2.2 CA-PLGA-NPs抗HepG2细胞活性的研究44-46
• 3 本章小结46-48
• 结论与讨论48-50
• 结语展望50-51
• 致谢51-52
• 参考文献52-60
• 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果60-61

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王志清;刘卫;徐辉碧;杨祥良;;载三氧化二砷的PEG-PLGA隐性纳米粒的制备及体外研究(英文)[J];Chinese Journal of Chemical Engineering;2007年06期

2 ;Effect of degradation of PLGA and PLGA/β-TCP scaffolds on the growth of osteoblasts[J];Chinese Science Bulletin;2011年10期

3 王晶,周庆颂,袁悦,莫凤奎;生物降解聚合物PLGA-PEG-PLGA的合成及表征[J];沈阳药科大学学报;2005年05期

4 曹颖光,王戎,王华均,吴慧华,胡立桉;骨髓间充质干细胞与PLGA体外附着的实验研究[J];临床口腔医学杂志;2005年04期

5 于家傲;路来金;李玲玲;刘志刚;邹广田;;高压合成HA/PLGA骨折内固定材料的体内外降解研究[J];中华手外科杂志;2006年01期

6 徐国富;牟申周;蔡惠;廖素三;陈蕾;尹志民;;三层式nCHAC/PLGA复合膜体外降解行为的研究[J];生物骨科材料与临床研究;2006年02期

7 郭晓东;;Surface Modification of Biomimetic PLGA-(ASP-PEG) Matrix with RGD-Containing Peptide:a New Non-Viral Vector for Gene Transfer and Tissue Engineering[J];Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science Edition);2006年03期

8 李艳妍;李立新;孙智辉;尹一子;;含紫杉醇PLGA缓释微球的研制及理化性质[J];中国生物制品学杂志;2007年05期

9 陈剑;樊新;周忠诚;阮建明;;PLGA材料仿生改性的最新进展[J];粉末冶金材料科学与工程;2008年06期

10 李双燕;;PLGA组织工程支架材料的研究与展望[J];国外丝绸;2009年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 郑强;潘志军;薛德挺;李杭;李建兵;;纳米PLGA/HA复合物和骨髓基质干细胞在软骨修复中的应用[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年

2 王汉杰;苏文雅;廖振宇;王生;常津;;PLGA/Liposome核壳纳米粒子的制备[A];天津市生物医学工程学会第30次学术年会暨生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2010年

3 王光林;吴辉;;联合静电纺丝法和转筒接收法制备PLGA—胶原—丝素纳米神经导管[A];第六届西部骨科论坛暨贵州省骨科年会论文汇编[C];2010年

4 赵洁;全大萍;廖凯荣;伍青;;含不同侧氨基密度的ASP-PEG-PLGA的合成与表征[A];中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2004年

5 黄艳霞;任天斌;张丽红;吕凯歌;蒋欣泉;潘可风;任杰;;PLGA/NHA-RGD复合材料的制备及性能研究[A];2006年上海市医用生物材料研讨会论文汇编[C];2006年

6 ;Synthesis of PLGA Labeled with ~(125)I[A];2006年上海市医用生物材料研讨会论文汇编[C];2006年

7 李艳辉;崔媛;张慧敏;关秀文;;利用等离子体技术在PLGA表面固定胶原的研究[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年

8 何树;毕龙;刘建;扈刚;孟国林;董鑫;郝赋;赵轶男;;新型PLGA/HMS-HA复合微球载体支架对兔骨髓间充质干细胞生物学行为的影响[A];中华医学会第七次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编[C];2013年

9 ;Preparation of PLGA Ultrasound Microbubble Loaded Hematoporphyrin and optimization of formulation[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年

10 李志宏;武继民;汪鹏飞;陈学忠;黄姝杰;关静;张西正;;BMP/PLGA缓释微球的制备与体外释放性能[A];第七届中国功能材料及其应用学术会议论文集（第4分册）[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 记者　白毅;合成温敏型PLGA-PEG-PLGA嵌段共聚物[N];中国医药报;2006年

2 尹东锋 钟延强;聚合物 药物 制备工艺 附加剂[N];中国医药报;2006年

3 李博;“人造红细胞”[N];大众卫生报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李玉华;载阿伦磷酸钠PLGA微球的磷酸钙骨水泥复合组织工程骨修复兔股骨髁骨缺损的实验研究[D];山东大学;2015年

2 周璇;RGD靶向微泡与载药微球在肝脏创伤渗血诊断和治疗中的研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

3 陶春;可注射镶嵌载生长因子壳聚糖微球的PLGA多孔复合微球支架的研究[D];第二军医大学;2015年

4 戴文达;新型结构PLGA/胶原三维可降解复合材料用于软骨再生的效果研究[D];复旦大学;2010年

5 刘福娟;聚乳酸/乙醇酸共聚物（PLGA）仿生细胞外基质的制备、表征及其与蛋白界面交互作用的研究[D];东华大学;2010年

6 黄术;RFP-PLGA骨缓释复合体的初步实验研究[D];中南大学;2013年

7 袁宝明;PLGA-PEG-PLGA温度敏感水凝胶的制备及在骨科应用基础研究[D];吉林大学;2015年

8 徐洋;表面改性的纳米羟基磷灰石/PLGA复合材料的制备及成骨活性实验研究[D];吉林大学;2010年

9 董树君;新型纳米改性生物玻璃/PLGA复合材料的制备及骨缺损修复的实验研究[D];吉林大学;2009年

10 韩瑞玲;鱼精蛋白包覆PLGA纳米粒用于疫苗载体的初步研究[D];华中科技大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 阳刚;复合肌腱修复材料—载细胞用防粘连性隔离/支架型PLGA膜的体外研制[D];中南大学;2010年

2 唐冠男;微流控技术原位合成多形貌PLGA/TiO_2复粒子及其体外药物释放的研究[D];华南理工大学;2015年

3 李文秀;形貌可控的PLGA/PCL复合粒子的制备及体外降解性能的基础研究[D];华南理工大学;2015年

4 黄卓颖;重组人表皮生长因子PLGA纳米粒经皮治疗大鼠糖尿病溃疡的作用研究[D];福建中医药大学;2015年

5 闻继杰;含胺基修饰beta-环糊精的可降解两亲性聚酯的合成及其对蛋白质和抗癌药物的控制释放[D];天津理工大学;2015年

6 王翠伟;基于点击化学制备PCL/PEG两亲性共网络聚合物以及不同支臂PLGA作为疫苗载体的初步研究[D];北京协和医学院;2015年

7 王共喜;PLA/AT纳米复合材料的制备与性能及PLGA纤维的表面改性[D];复旦大学;2014年

8 刘青;植入体材料与PLGA载药微球的复合研究[D];西南交通大学;2015年

9 张科技;蚕丝-PLGA支架的生物相容性及力学性能的研究[D];浙江省医学科学院;2015年

10 黄晓君;关节腔注射用青藤碱-PLGA微球—温敏凝胶的制备及评价[D];广东药学院;2015年

  本文关键词：小菜蛾抗菌肽的分离纯化及PLGA纳米载体给药，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：459019