金花茶多酚抗2型糖尿病的开发应用研究

发布时间：2020-03-24 08:47

【摘要】：目的:观察金花茶多酚(Camellia nitidissima polyphenols,CNP)对2型糖尿病大鼠血糖和胰腺的影响,和CNP对胰岛细胞瘤细胞(INS-1)的增殖活力影响、抗链尿佐菌素(streptozotocin,STZ)损伤和抗氧化作用,探讨金花茶多酚对胰腺的保护作用和抗糖尿病作用。方法:建立2型糖尿病大鼠模型的方法为高糖高脂饲料喂养4周结合腹腔注射小剂量STZ(30mg/kg)。设正常组,高脂组,模型组,CNP(50、100、200 mg/kg)组。各CNP组预防给药7天后造模,用快速血糖仪测定各组大鼠的空腹血糖值(FBG)。造模后分别于第1,2,3天摘取大鼠胰腺,制成石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色,观察胰腺组织病理变化;免疫组化法(IHC)标记胰岛素分泌情况并统计胰岛细胞阳性率。建立INS-1细胞损伤模型的方法为STZ(160μg/mL)干预24小时。设正常对照组,损伤组(STZ组),预防组(CNP 5、10、20μg/m L+STZ组)。将对数生长期的INS-1细胞按1×10~4个/孔接种于96孔板,细胞贴壁生长后分组给药。利用CCK-8试剂盒检测CNP对INS-1细胞活性的影响,和对STZ损伤的细胞增殖活力的影响。建立INS-1细胞氧化应激模型的方法为Cu~(2+)(150μM)干预2小时。设正常对照组,模型组(Cu~(2+)组),抗氧化组(Cu~(2+)+CNP 5、10、20μg/mL组)。利用CCK-8试剂盒检测CNP对细胞氧化应激模型增殖活力的影响。利用丙二醛(MDA)试剂盒检测细胞培养液中MDA的含量。结果:与正常组和高脂组比较,模型组大鼠FBG显著升高(P0.05),胰岛β细胞有明显形态学改变,胰岛细胞阳性率明显降低(P0.05)。与模型组比较,CNP中、高剂量(100,200 mg/kg)组FBG显著降低(P0.05),并且呈现一定程度的剂量相关性,胰岛β细胞损伤程度明显降低,胰岛细胞阳性率显著回升(P0.05),CNP低剂量组无明显差异。与STZ损伤组比较,CNP中、高剂量(10、20μg/mL)预防组细胞存活率显著升高(P0.05),细胞形态学较正常对照组更为接近。与氧化应激模型组比较,CNP中、高剂量(10、20μg/mL)抗氧化组细胞存活率显著升高(P0.05),MDA含量显著降低(P0.05)。结论:金花茶多酚能够降低2型糖尿病大鼠空腹血糖,保护大鼠胰腺组织,减轻胰岛β细胞损伤,促进胰岛素分泌,而且能够显著性降低细胞中MDA水平,提示金花茶多酚能保护胰腺组织,增强胰岛β细胞分泌胰岛素的功能,发挥抗糖尿病作用,其作用机制可能与抗氧化、抑制氧化应激有关。
【图文】：

标准曲线,没食子酸,标准曲线

采用 SPSS18.0 统计软件对所有数据进行统计学处理。所有数据均以均数±标准差( x±s)表示，组间差异性判断采用 t 检验或单因素方差分析，以P<0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 金花茶多酚纯度采用福林酚法测定茶多酚含量。以没食子酸作为标准对照品，制作没食子酸标准曲线，见图 1。回归方程为：y = 1.4975x - 0.01（R2= 0.9905）。精密称取 CNP 样品 0.54 mg，配制成 1 mL 水溶液，按照福林酚法检测，在765 nm 吸光度为 0.07847。根据公式（1）计算，样品中茶多酚含量为 97.04%

细胞分布,组织形态,细胞核,金花茶

2.2.3 金花茶多酚对大鼠胰腺组织形态的影响造模后分别于第 1，2，3 天分组摘取大鼠胰腺，制成石蜡切片。采用苏木精—伊红（HE）染色法标记细胞结构，细胞核着紫蓝色，细胞质着红色。光镜下观察：正常组大鼠胰岛为近圆形的细胞团，分散于胰腺腺泡之间，边缘界限清晰整齐，数量较多，细胞分布均匀。胞浆丰富，细胞核多为椭圆形，大小均一。高脂组与正常组的胰腺组织相似。模型组胰岛数量显著下降，分布稀疏，边缘不清，胰岛细胞数量减少，松散紊乱，，体积缩小，且组织损伤程度随时间加剧。与模型组相比，CNP 中、高剂量组损伤程度明显改善，且改善情况与剂量和时间呈一定的正相关性。见图 2。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】