姜黄素对非酒精性脂肪肝细胞自噬的影响

发布时间：2020-04-02 23:41

【摘要】：目的:非酒精性脂肪性肝病作为一种常见的代谢性疾病,严重威胁着人类的生命健康。自噬(autophagy)通过“自我清除”的方式,双层膜结构的自噬小泡包裹细胞内产生的一些损坏性蛋白或细胞器后,然后将其送入酵母和植物体内的液泡中或动物体内的溶酶体中进行进一步的降解,从而得到循环利用的一个过程,对于维持细胞内环境的稳定具有重要作用。姜黄素是从草本植物姜黄中提取的天然色素,也是其活性成分。非酒精性脂肪性肝病变性肝细胞存在自噬现象,且自噬在脂肪酸诱导肝细胞损伤过程中可能发挥保护作用,姜黄素又能够诱导许多肿瘤细胞发生自噬。因此,探讨姜黄素是否通过诱导变性肝细胞自噬,进而清除非酒精性脂肪性肝病肝细胞内脂肪聚集,达到保护肝细胞作用,为临床应用姜黄素治疗非酒精性脂肪肝提供新的依据。方法:应用高脂饮食复制NAFLD小鼠模型,观察姜黄素对NAFLD小鼠模型肝组织病理的影响及小鼠肝组织中LC3-Ⅱ蛋白水平。应用10%医用脂肪乳复制NAFLD细胞模型通过油红O染色观察细胞内脂滴变化,Western blot检测细胞中自噬泡标志分子LC3-Ⅱ蛋白质表达的影响,吖啶橙染色后在荧光显微镜下观察不同浓度不同时间姜黄素干预后自噬细胞变化以及电镜下观察自噬小体的变化,明确姜黄素对非酒精性脂肪肝细胞自噬作用的影响。结果:与NAFLD模型组相比,姜黄素处理组NAFLD小鼠肝组织肝小叶结构基本正常,无明显纤维化形成,轻度肝细胞脂肪变性及少量炎症细胞浸润;与NAFLD模型组相比,姜黄素组中肝脏组织内自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达明显上调。不同浓度姜黄素干预脂肪细胞,光学显微镜下观察结果表明50μmol/L姜黄素对脂肪细胞抑制明显,且50μmol/L的姜黄素作用于L-02细胞6 h,12 h后会导致细胞内LC3的表达量明显上调,而24 h组肝细胞LC3表达没有继续增加,说明姜黄素主要促进脂肪变性L-02细胞早期发生自噬;吖啶橙染色后在荧光显微镜下观察,不同浓度姜黄素干预后,自噬细胞染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒,自噬发生时间主要集中在6 h,12 h,说明姜黄素诱导早期细胞自噬。结论:姜黄素可能成为非酒精性脂肪肝病的有效防治药物,其作用机制与促进细胞自噬有关。
【图文】：

小鼠模型,姜黄素,肝细胞,脂肪变性

第3章实验结果3.1 姜黄素对 NAFLD 小鼠模型肝组织病理的影响① 对照组：可观察到肝组织的生理结构完整、清晰，肝小叶及汇管区的结构好且无脂肪变性、坏死及明显的炎症细胞浸润情况，未见纤维间隔的形成。② NAFLD模型组：可观察到肝细胞偏肿大，，且部分呈现气球样变，细胞核周围可以观察到较多大小不等的脂肪滴，肝细胞发生严重的脂肪变性；肝窦扩大纤维间隔形成，部分有假小叶形成；可观察到有大量炎细胞的浸润。③ 姜黄素组：可观察到轻度的肝细胞脂肪变性及少量炎症细胞的浸润；肝小的结构基本正常，且无明显的纤维化形成。

姜黄素,蛋白质表达,肝组织,油红

图 2 姜黄素对肝组织 LC3-Ⅱ蛋白质表达的影响（Control 正常对照组, Model 模型组, Curcumin 姜黄素组）02 细胞油红 O 染色生长期的 L-02 细胞，在 10%医用脂肪乳注射液和 10%胎牛血-1640 完全培养基进行细胞培养，孵育细胞 24 h，48 h，油红镜下观察。正常肝细胞胞核圆形，边缘清晰，胞浆内未见明显肪乳诱导的脂肪变性肝细胞，细胞肿大，胞浆内可见红色脂滴ol/L 姜黄素处理脂肪变性肝细胞 24 h，48 h，胞浆内可见红色 3）
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【相似文献】