动物多肽毒素的异源表达纯化与活性研究

发布时间：2024-01-28 21:20

　　动物多肽毒素有很多优良的性质,其作用范围广泛,对血液系统、神经系统、免疫系统以及细菌真菌均有不同的作用,是开发新型药物和新型杀虫剂抗生素的重要资源库。其中,富含二硫键的多肽毒素多样性丰富,可以特异性地作用并调节电压门控离子通道,从而阻断或抑制细胞电信号的传导,因而有着极其重要的研究价值。针对动物毒素的异源表达和纯化,本文开展了以下两个工作,为深入研究有毒动物毒素的结构功能以及研发新型多肽类药物奠定了基础。1、蜈蚣毒素κ-SLPTX-Ssm1b的表达纯化及活性研究。κ-SLPTX-Ssm1b是蜈蚣S colopendra subspinipes mutilans完整转录产物所构建的cDNA文库中与电压敏感钾离子通道抑制剂κ-SLPTX-Ssm1a同源的多肽。且两者含三对位置相同的二硫键,因此可能存在类似的空间结构和相似的生理活性。本实验利用pET-43-His-SUMO原核表达载体,通过E.coli SHuffle^TM菌种自动诱导表达重组蛋白,随后利用镍柱和RP-HPLC纯化以及Ulp1激酶酶切获得目的蛋白,最终通过MALDI-TOF质谱鉴定其分子量为5532.18...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 动物毒素的介绍
        1.1.1 蜈蚣毒素的多样性及应用
        1.1.2 蚂蚁毒素的多样性及应用
    1.2 动物毒素的表达
    1.3 本文的研究思路
第二章 利用大肠杆菌异源表达系统表达蜈蚣毒素κ1b
    2.1 前言
    2.2 实验器材与材料准备
        2.2.1 实验仪器
        2.2.2 实验材料与试剂
        2.2.3 实验部分溶液的配制
    2.3 实验方法与过程
        2.3.1 重组表达质粒pET-43-His-SUMO-κ1b的构建
        2.3.2 κ1b的表达与纯化
        2.3.3 κ1b的电生理活性检测
    2.4 实验结果与分析
        2.4.1 重组表达质粒pET-43-His-SUMO-κ1b的构建
        2.4.2 κ1b的表达与纯化
        2.4.3 κ1b的电生理活性检测
    2.5 讨论
第三章 利用大肠杆菌异源表达系统表达三种蚂蚁毒素
    3.1 前言
    3.2 实验器材与材料准备
    3.3 实验方法与过程
        3.3.1 重组表达质粒pET-43-His-SUMO-Ae1d/e/g的构建
        3.3.2 Ae1d/Ae1e/Ae1g的表达与纯化
    3.4 实验结果与分析
        3.4.1 重组表达质粒的构建
        3.4.2 Ae1d/Ae1e/Ae1g的表达与纯化
    3.5 讨论
第四章 总结与展望
致谢
参考文献
作者在学期间取得的学术成果



本文编号：3887792