葛根芩连汤通过miR-146b/SIRT1改善肝脏胰岛素抵抗的机制研究

发布时间：2024-01-29 07:37

　　背景:2型糖尿病已经成为全球性危害人类健康的重要问题,其特征主要是胰岛素抵抗和胰岛素分泌相对不足。改善胰岛素抵抗是延缓2型糖尿病进程的重要手段。葛根芩连汤是传统经方,前期研究证实该方可以改善初诊2型糖尿病患者的胰岛素敏感性,但其作用机制尚不明了。目的:应用网络药理学方法联合质谱分析技术探讨葛根芩连汤的化学组分及该方潜在的作用机制。本研究着眼于葛根芩连汤对肝脏胰岛素抵抗的调节作用,从体内体外研究葛根芩连汤通过miR-146b/SIRT1改善肝脏胰岛素抵抗的作用,力求阐明葛根芩连汤从“肝”治疗糖尿病。方法:(1)应用网络药理学方法,结合生物信息数据库分析葛根芩连汤中草本来源药物的化学组成及其潜在治疗靶点与涉及的信号通路,从多角度综合地分析葛根芩连汤的作用机制。(2)以高脂诱导的C57BL/6J胰岛素抵抗小鼠为模型,用不同剂量的葛根芩连汤干预,腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT)及腹腔胰岛素耐量实验(IPITT)评估胰岛素抵抗状态,Elisa法检测小鼠血清中生化、胰岛素水平,肝脏HE染色,蛋白印迹法结合qPCR检测肝脏组织SIRT1/FoxO1信号通路中相关的蛋白及mRNA的表达。(3)以棕榈酸...

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
上篇
    第一章 文献研究
        1 传统医学对肝脏胰岛素抵抗的认识
            1.1 定义
            1.2 历史沿革
            1.3 中医对肝脏胰岛素抵抗病因病机的认识
            1.4 中医对肝脏胰岛素抵抗的治疗
        2 现代医学对肝脏胰岛素抵抗的研究
            2.1 定义
            2.2 病因病机
            2.3 诊断
            2.4 治疗
    第二章 课题组前期对肝脏胰岛素抵抗的研究成果
        1 葛根芩连汤的立方依据及背景
        2 葛根芩连汤治疗胰岛素抵抗的前期研究基础
            2.1 临床实验
            2.2 本课题的创新构思
    第三章 microRNA-146b与SIRT1研究进展
        1 miR-146b的研究进展
        2 SIRT1与胰岛素抵抗的研究进展
            2.1 SIRT1与骨骼肌胰岛素抵抗
            2.2 SIRT1与脂肪组织胰岛素抵抗
            2.3 SIRT1与肝脏胰岛素抵抗
    参考文献
中篇
    第一章 葛根芩连汤的药理学分析
        1 实验材料
            1.1 药物
            1.2 动物
            1.3 仪器设备
        2 含药血清色谱质谱联合分析
            2.1 动物喂养
            2.2 动物分组及给药方法
            2.3 含药血清的制备
            2.4 含药血清的质谱测定
        3 葛根芩连汤的网络药理学分析
            3.1 网络构建与分析
            3.2 结果与分析
        参考文献
    第二章 葛根芩连汤对高脂诱导肝脏胰岛素抵抗小鼠SIRT1/FoxO1信号通路的影响
        前言
        1 实验材料及方法
            1.1 实验仪器
            1.2 实验动物
            1.3 高脂饲料
            1.4 实验试剂
            1.5 蛋白印迹实验所用抗体
            1.6 Real-time PCR所用引物序列
        2 实验方法
            2.1 肝脏胰岛素抵抗小鼠模型的制备
            2.2 动物分组及给药
            2.3 小鼠腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT)
            2.4 小鼠腹腔胰岛素耐量实验(IPITT)
            2.5 标本的留取和血清指标的测定
            2.6 各血清指标ELISA检测
            2.7 肝脏组织病理
            2.8 肝脏组织RNA提取
            2.9 逆转录反应制备cDNA
            2.10 Real-time PCR检测
            2.11 肝脏组织总蛋白提取
            2.12 BCA测定蛋白浓度
            2.13 免疫沉淀
            2.14 SDS-PAGE电泳
            2.15 统计学分析
        3 实验结果
            3.1 高脂喂养对小鼠的影响
            3.2 各组给药前后体重和血糖的变化
            3.3 各组给药前后肝酶的变化
            3.4 各组给药前后血脂的变化
            3.5 各组给药前后胰岛素、HOMA-IR的变化
            3.6 各组IPGTT的变化
            3.7 各组IPITT的变化
            3.8 各组小鼠肝脏病理结果比较
            3.9 各组小鼠SIRT1、FoxO1 mRNA含量
            3.10 各组小鼠SIRT1/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平比较
        4 分析及讨论
        5 实验结论
        参考文献
    第三章 葛根芩连汤含药血清对胰岛素抵抗HepG2细胞SIRT1/FoxO1信号通路的影响
        前言
        1 实验材料
            1.1 细胞
            1.2 试验药物及试剂
            1.3 主要试剂的配制
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立
            2.3 HepG2细胞实验分组
            2.4 HepG2细胞siRNA的转染
            2.5 糖原试剂盒检测糖原合成能力
            2.6 MTT法检测药物对HepG2细胞存活率的影响
            2.7 细胞蛋白的提取
            2.8 BCA测定蛋白浓度
            2.9 免疫沉淀
            2.10 SDS-PAGE电泳
            2.11 细胞mRNA的提取
            2.12 逆转录反应制备cDNA
            2.13 Real-time PCR检测
            2.14 数据统计
        3 实验结果
            3.1 棕榈酸最大无毒浓度的测定
            3.2 吡格列酮最大无毒浓度的测定
            3.3 葛根芩连汤含药血清最大无毒浓度的测定
            3.4 葛根芩连汤对HepG2细胞糖原合成能力的影响
            3.5 葛根芩连汤对SIRT1/FoxO1信号通路相关蛋白表达的影响
            3.6 葛根芩连汤对PPARγ、FABP4相关蛋白表达的影响
            3.7 SIRT1介导葛根芩连汤对HepG2细胞FoxO1、PPARy的调控作用
        4 分析及讨论
        5 实验结论
        参考文献
    第四章 葛根芩连汤对肝脏胰岛素抵抗下miR-146b/SIRT1的影响
        前言
        1 实验材料
            1.1 实验仪器
            1.2 实验细胞株
            1.3 实验动物
            1.4 实验试剂
        2 实验方法
            2.1小鼠肝脏组织RNA的提取
            2.2. HepG2细胞转染
            2.3细胞RNA的提取
            2.4逆转录反应制备cDNA
            2.5 Real-time PCR检测
            2.6细胞蛋白的提取
            2.7 BCA测定蛋白浓度
            2.8免疫沉淀
            2.9 SDS-PAGE电泳
            2.10数据统计
        3实验结果
            3.1 miR-146b在各组小鼠肝脏中的表达
            3.2 miR-146b在HepG2细胞中的表达
            3.3 miR-146b mimics转染后SIRTl/FoxOl信号通路相关分子蛋白及mRNA的变化
            3.4 miR-146b inhibitor转染后SIRTl/FoxOl信号通路相关分子蛋白及mRNA的变化
        4讨论及分析
        5实验结论
        参考文献
下篇
    全文小结
        1研究结论
        2创新点
        3研究不足
        4展望
附录
    附件一缩略词英汉对照表
    附件二中医证候评分表
    附件三葛根芩连汤中药材主要有效化学成分
    附件四葛根芩连汤潜在参与信号通路
    附录五miR-146b和SIRT1预测位点
读博士学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3887912