鹿角多肽的分离纯化及成骨活性研究

发布时间：2024-06-30 11:35

　　目的:采用酶解超滤方法提取鹿角多肽,考察鹿角多肽对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)活性的影响,从而为应用鹿角多肽构建细胞支架打下实验基础。方法:(1)精制鹿角,选取四种酶分别进行酶解,进行定性分析和氨基酸分析。(2)采用星点设计-效应面法优化制备鹿角多肽,以酶用量、底物浓度、温度为自变量,多肽含量峰面积为因变量,分别进行多元线性回归和二项式方程拟合,结合最佳数学模型描绘效应面,确定最佳工艺并进行验证试验。(3)采用超滤提取分子量(800-1500)鹿角多肽;无菌条件下培养传代BMSCs;筛选最佳浓度;考察最佳浓度鹿角多肽对BMSCs增殖、生长周期、碱性磷酸酶(ALP)的影响。结果:(1)采用TLC法检测鹿角胶,检测结果符合药典相关标准;采用胃蛋白酶酶解鹿角胶,可以得到分子量在800-1500鹿角多肽;该鹿角多肽溶液的氨基酸浓度为21.025μmol/m L。(2)星点设计-效应面法优选出的最佳工艺条件为酶用量4.0%、底物浓度6%、温度40℃,最佳工艺验证试验结果,与二项式拟合方程预测值偏差为1.41%,最佳工艺具...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1鹿角胶的TLC鉴别

蒸干，残渣用0.02mo.02mol/L盐酸溶液稀释至试品溶液20μl注入氨基试品与对照品色谱相应的在相同位置有明显相同颜

图2底物浓度与肽含量面积关系

5：55：0.1（体积比）；检测波长：UV220nm；流速：0.5mL/min；柱温积：10μL）备的样品溶液在上述色谱条件下分析。然后用GPC数据处理软件，将据代入校正曲线方程中进行计算，即可达到样品中肽的相对分子质量及用峰面积归一化法计算相对分子质量范围在1000μ以下....

图3酶用量与肽含量面积关系

图3酶用量与肽含量面积关系度配置底物浓度5%，酶用量2.5%，酶解时间6h，PH3.5，酶解温度分、40、45、50℃，酶解。随着温度的升高，多肽面积先增加在40℃左右然后降低后继续增加。（图4）图4温度与肽含量面积关系配置底物浓度5%，酶用量2.5%....

图4温度与肽含量面积关系

酶解时间6h，PH3.5，酶解温度40℃，酶解。随着酶用量的增加，出现了先增加再降低，再增加降低的过程，在1.5%左右达到最高。（图3）图3酶用量与肽含量面积关系度配置底物浓度5%，酶用量2.5%，酶解时间6h，PH3.5，酶解温度分别、40、45、50℃....

本文编号：3998717