藻蓝色素蛋白抗肺癌增殖的体外功能研究

发布时间：2023-12-09 19:02

　　藻蓝蛋白是我国允许使用的天然食品着色剂之一,同时也是一种重要的安全无副作用的功能性食用色素。本研究以非小细胞肺癌A549、H1299、H460和LTEP-a-2四种细胞系作为模型,研究藻蓝蛋白在肺癌中的功能及其潜在的调控途径。首先对藻蓝蛋白处理后的肺癌细胞的存活率和生长曲线进行了测定,结果显示处理组的细胞存活率和生长速率显著下降,说明藻蓝蛋白能够抑制肺癌细胞的增殖。为了进一步探究藻蓝蛋白是如何抑制细胞的增殖,利用流式细胞术检测了细胞的周期分布情况,发现细胞周期转换点相关基因(CyclinE、CyclinA)的表达异常而引起细胞发生G1(LTEP-a-2细胞)或S期(A549、H1299、H460细胞)阻滞。为了分析藻蓝蛋白处理后对肺癌细胞的群体依赖性和增殖能力的影响,检测了藻蓝蛋白处理后细胞的集落的形成能力,结果表明,与对照组相比,藻蓝蛋白能够使肺癌细胞的集落克隆数显著下降,即藻蓝蛋白能够降低肺癌细胞的独立生存能力和环境适应能力。最后利用划痕修复试验探究了藻蓝蛋白处理后的肺癌细胞体外迁移能力,结果表明,藻蓝蛋白处理后的细胞迁移率有显著降低,说明藻蓝蛋白能够抑制非小细胞肺癌的迁移能力,紧...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 藻蓝色素蛋白研究现状
    1.2 转录组学
    1.3 PI3-AKT信号通路
    1.4 NF-κB信号通路
    1.5 研究目的与内容
        1.5.1 研究目的与意义
        1.5.2 研究内容
            1.5.2.1 藻蓝色素蛋白对细胞增殖及迁移的影响
            1.5.2.2 藻蓝色素蛋白对细胞凋亡的影响
            1.5.2.3 转录组学分析及验证
        1.5.3 技术路线
第2章 藻蓝色素蛋白对非小细胞肺癌体外增殖及迁移的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 材料与试剂
        2.1.2 仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 MTT法测定肺癌细胞生长曲线
        2.2.3 吉姆萨染色检测肺癌细胞的集落形成能力
        2.2.4 流式细胞术检测细胞周期
        2.2.5 体外划痕修复实验
        2.2.6 提取细胞总RNA
        2.2.7 反转录、实时荧光定量PCR
        2.2.8 提取细胞或组织的全蛋白
        2.2.9 Western Blot免疫印迹
    2.3 研究结果
        2.3.1 藻蓝蛋白对肺癌细胞的体外增殖能力的影响
        2.3.2 藻蓝蛋白对肺癌细胞集落形成能力的影响
        2.3.3 藻蓝蛋白对肺癌细胞的周期分布的影响
        2.3.4 藻蓝蛋白对肺癌细胞的体外迁移能力的影响
    2.4 小结
第3章 藻蓝色素蛋白对非小细胞肺癌体外凋亡的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 材料与试剂
        3.1.2 仪器与设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 倒置显微镜观察藻蓝蛋白对肺癌细胞形态的影响
        3.2.2 流式细胞术检测细胞凋亡
        3.2.3 反转录、实时荧光定量PCR
    3.3 研究结果
        3.3.1 藻蓝蛋白对肺癌细胞形态的影响
        3.3.2 藻蓝蛋白对肺癌细胞凋亡的影响
        3.3.3 藻蓝蛋白影响凋亡相关基因的表达
        3.3.4 藻蓝蛋白影响凋亡相关蛋白的表达
    3.4 小结
第4章 转录组学对藻蓝蛋白调控非小细胞肺癌生物学过程的分析及验证
    4.1 实验方法
        4.1.1 提取total RNA
        4.1.2 反转合成c DNA
    4.2 研究结果
        4.2.1 RNA的完整度检测
        4.2.2 测序饱和度分析
        4.2.3 冗余序列分析
        4.2.4 表达量分析
        4.2.5 样本聚类分析
        4.2.6 表达差异分析
        4.2.7 差异基因GO分类统计
        4.2.8 差异基因KEGG通路富集分析
        4.2.9 差异基因KEGG通路可视化
        4.2.10 调控PI3-AKT与NF-κB相关基因转录水平检测
        4.2.11 藻蓝蛋白对PI3-AKT通路活性的影响
        4.2.12 藻蓝蛋白对NF-κB通路活性的影响
    4.3 小结
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附录
研究成果
致谢



本文编号：3871972