非编码RNA miR-9和CDKN2B-AS对膀胱癌细胞的侵袭和吉西他滨化疗敏感性的影响

发布时间：2024-03-18 22:38

　　第一部分及第二部分目的:膀胱肿瘤是泌尿生殖系最常见的肿瘤,尤其在我国,其发病率和死亡率均占泌尿系肿瘤首位。膀胱癌中90%是移行细胞癌,且进展率和复发率高^[1]。如果肿瘤只局限在原发部位,经手术切除即可治愈。目前治疗失败的主要原因是发生远处转移或者膀胱壁多发转移,膀胱癌一旦转移,对放、化疗敏感性差,治疗起来非常棘手。所以,加强对膀胱癌转移的分子机制的研究尤为迫切。色素框同源物7(Chromobox homolog 7,CBX7)属于色素框家族,其表达和功能在胰腺癌等多种肿瘤存在显著异常。本研究拟检测CBX7基因在膀胱癌组织中的表达,明确其表达发生改变的原因;构建表达载体,上调膀胱癌T24细胞中CBX7蛋白的表达,检测CBX7高表达对T24细胞侵袭的影响。方法:荧光定量PCR检测45例膀胱癌组织表达中的CBX7 mRNA表达。Miranda等软件预测能够调控CBX7基因的microRNA。检测miR-9前体对CBX7基因表达的影响。荧光定量PCR检测膀胱癌组织中miR-9表达。应用荧光素酶报告基因表达分析明确miR-9是否与CBX7基因3’UTR结合,负性调控CBX7...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 CBX7基因在膀胱癌中表达改变的分子机制
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 组织标本及细胞系
            2.1.2 相关分子生物学实验材料
            2.1.3 主要仪器
            2.1.4 国际生物学信息途径和计算机分析软件包
        2.2 实验方法
            2.2.1 TRIZOL法提取总RNA
            2.2.2 总RNA逆转录为cDNA
            2.2.3 荧光定量PCR
            2.2.4 转染
            2.2.5 实验分组
            2.2.6 荧光素酶报告基因表达分析
            2.2.7 Westernblotting
            2.2.8 统计分析
    3 实验结果
        3.1 CBX7mRNA在膀胱癌组织中的表达
        3.2 miR-9对CBX7基因表达的影响
        3.3 膀胱癌组织中miR-9的表达
        3.4 miR-9与CBX7表达的相关性分析
        3.5 荧光素酶报告基因表达分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分 CBX7基因对膀胱癌T24细胞侵袭能力的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 相关分子生物学实验材料
            2.1.3 主要仪器
            2.1.4 国际生物学信息途径和计算机分析软件包
        2.2 实验方法
            2.2.1 转染
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 Westernblotting
            2.2.4 外侵袭实验
            2.2.5 统计分析
    3 实验结果
        3.1 pcDNA-CBX7对T24细胞中CBX7基因表达的影响
        3.2 CBX7过表达对膀胱癌T24细胞侵袭能力的影响
        3.3 CBX7过表达对膀胱癌T24细胞中MMP2和VEGF蛋白表达的影响
    4 讨论
    5 结论
第三部分 长链非编码RNA CDKN2B antisense RNA1抑制膀胱尿路上皮癌对吉西他滨的化疗敏感性
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 临床组织标本
            2.1.3 相关分子生物学实验材料
            2.1.4 主要仪器
            2.1.5 国际生物学信息途径和计算机分析软件包
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 实时定量PCR
            2.2.3 细胞转染
            2.2.4 细胞增殖实验
            2.2.5 凋亡率检测
            2.2.6 药物敏感性试验
            2.2.7 Westernblotting
            2.2.8 荧光素酶检测
            2.2.9 统计分析
    3 实验结果
        3.1 CDKN2B-AS基因在BUC中高表达
        3.2 CDKN2B-AS在BUC中的表达与吉西他滨的不良反应相关
        3.3 CDKN2B-AS基因敲除失活Wnt信号通路
        3.4 Wnt信号通路介导了CDKN2B-AS调控T24/GEM细胞对吉西他滨敏感性
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3931921