沉默ECEL1对肝癌细胞DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响

发布时间：2024-05-21 05:19

　　目的:研究沉默ECEL1对人肝癌细胞(BEL-7404)DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1表达的影响。方法:(1)利用ECEL1基因RNA干扰慢病毒感染人肝癌细胞(BEL-7404),与此同时设立对照组,在荧光显微镜下来观察肝癌细胞的慢病毒感染效率;(2)使用qPCR技术来检测沉默ECEL1后人肝癌细胞(BEL-7404)ECEL1,DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1 mRNA的表达水平。(3)使用WB技术检测沉默ECEL1后人肝癌细胞(BEL-7404)DUSP1、THBS1、PTEN及EGR1蛋白质的表达水平。结果:(1)慢病毒感染人肝癌细胞(BEL-7404)72h后,荧光显微镜下显示肝癌细胞状态良好,感染效率达到80%以上;qPCR技术检测结果显示ECEL1基因的沉默率高达84.1%,shECEL1组ECEL1基因的mRNA表达受到显著抑制(p<0.05)。(2)qPCR技术检测肝癌细胞相关基因mRNA的表达,结果显示:沉默ECEL1后,DUSP1、THBS1、PTEN mRNA表达上调,EGR1 mRNA表达下调。(3)WB技术检测肝癌细胞相关基因蛋白质...

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图3.1慢病毒感染72h后荧光镜检图

14BCD图3.1慢病毒感染72h后荧光镜检图A感染慢病毒PSCSI-GFP的人肝癌细胞(BEL-7404)(×100)B感染慢病毒PSCSI-GFP的人肝癌细胞(BEL-7404)(×200)C感染慢病毒CON053的人肝癌细胞(BEL-7404)(×100)D感染慢病毒CON....

图3.2ECEL1mRNA的表达

15物无非特异性引物二聚体并且特异性良好，也未出现扩增污染。综上，表明沉默ECEL1基因的人肝癌细胞已成功构建，可进行下游实验。表3.2沉默ECEL1基因后mRNA表达丰度（X±S）及沉默率细胞分组Average（2-ΔΔCt）STDEV沉默率PshECEL10.1590.015....

图3.3ECEL1扩增曲线

15物无非特异性引物二聚体并且特异性良好，也未出现扩增污染。综上，表明沉默ECEL1基因的人肝癌细胞已成功构建，可进行下游实验。表3.2沉默ECEL1基因后mRNA表达丰度（X±S）及沉默率细胞分组Average（2-ΔΔCt）STDEV沉默率PshECEL10.1590.015....

图3.5DUSP1mRNA的表达

组的1.000±0.026（p<0.05）（表3.3，图3.5-3.7）。该扩增产物熔解曲线没有主峰的异常增宽，呈单峰图形，并且没有出现杂峰，表明扩增产物无非特异性引物二聚体并且特异性良好，也未出现扩增污染。综上结果，表明沉默ECEL1基因后，与shCtrl组相比，....

本文编号：3979662