棕榈酰转移酶ZDHHC5蛋白在TRAIL诱导的细胞凋亡中的功能研究

发布时间：2024-06-13 19:40

　　目的:细胞凋亡的异常与癌症的发生发展密切相关,对其机制的探究对于癌症的治疗具有深远意义。肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,,TRAIL)是一种促凋亡配体,能够抑制肿瘤生长而不损伤正常宿主细胞。已知棕榈酰转移酶ZDHHC蛋白的抑制可促进癌细胞死亡。然而到目前为止,棕榈酰转移酶ZDHHC与细胞凋亡之间的关系尚未被阐明。在此,我们主要对定位于细胞膜上的棕榈酰转移酶家族成员ZDHHC5蛋白在癌症中扮演的角色及其与TRAIL诱导的细胞凋亡之间的相关性进行探究。方法:首先,使用蛋白棕榈酰化抑制剂2-溴代棕榈酸(2‐BP)来处理人骨肉瘤细胞U2OS和宫颈癌细胞He La,利用SYTOX-Green染色法检测细胞死亡水平,利用Western blot技术分析TRAIL诱导的细胞凋亡水平及MAPK、NF-κB信号通路激活水平。随后利用CRISPR-Cas9技术在U2OS细胞中构建ZDHHC5敲除型(ZDHHC5-KO)细胞系,利用SYTOX-Green染色法、荧光细胞活性检测法(...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词表
引言
1 材料
    1.1 实验主要试剂
    1.2 主要实验仪器设备
2 实验方法
    2.1 质粒构建
    2.2 细胞的培养
    2.3 CRISP-Cas9构建zdhhc5 knock-out细胞系
    2.4 Western blot检测
    2.5 SYTOX-Green染色法
    2.6 Cell Titer-Glo Assay
    2.7 Annexin V-FITC/PI Staining
    2.8 Luciferase reporter gene assay
3 结果
    3.1 2BP处理可增加U2OS细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感性
    3.2 2BP处理可增加He La细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感性
    3.3 2BP处理显著抑制TRAIL诱导的炎症信号通路的激活
    3.4 ZDHHC5 缺失增加U2OS细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感性
    3.5 TRAIL诱导的炎症信号通路在ZDHHC5 缺陷细胞中显著下调
    3.6 ZDHHC5在Caspase级联效应的上游发挥作用
4 讨论
参考文献
综述 蛋白质的棕榈酰化与癌症的研究
    参考文献
作者简介



本文编号：3993555