基于微滴式数字PCR的非小细胞肺癌EGFR基因突变检测技术及应用

发布时间：2024-07-01 22:39

　　背景:基于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的靶向治疗已经逐渐成为非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)综合治疗的一部分,临床迫切需要EGFR基因突变检测技术以确定靶向治疗敏感患者,并监测其耐药后新出现的基因突变,以提供个体化诊疗及临床决策指导。与组织活检相比,循环中游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)与肿瘤所包含基因突变信息具有高度一致性,能实时、全面地反映肿瘤全部的遗传学信息,因此目前血液已成为EGFR突变检测常规检材。唾液同样提供了高质量的基因组DNA,作为cfDNA来源与血液相媲美,由于取材方便、无创且避免血源性感染等独特优势有望成为EGFR突变检测理想的补充检材。但体液中cfDNA含量少且肿瘤突变频率低,EGFR突变的检测需要更加敏感的方法。绝对定量的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddRCR)技术具有更高的准确性,更高的分辨率和更高的灵敏度,可实现对cfDNA低频率突变的检测,满足目前临床上对于靶向治疗EGFR基因突变的检测...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
第1章 基于ddPCR的非小细胞肺癌EGFR基因突变检测技术的建立
    1.1 实验材料
        1.1.1人肺腺癌细胞株
        1.1.2 试剂及耗材
        1.1.3 设备
    1.2 实验方法
        1.2.1 人肺腺癌细胞株培养
        1.2.2 人肺腺癌细胞株基因组DNA的提取超碎
        1.2.3 探针及引物的设计与合成
        1.2.4 微滴式数字PCR实验
    1.3 实验结果
        1.3.1 基于ddPCR的EGFR基因突变检测体系退火温度的优化
        1.3.2 基于ddPCR的EGFR基因突变检测技术灵敏度分析
        1.3.3 基于ddPCR的EGFR基因突变检测技术的应用
    1.4 讨论
    1.5 本章小结
    附图表
        附图
        附表
第2章 基于ddPCR的EGFR-T790M突变检测技术的性能验证
    2.1 实验材料
        2.1.1 临床血浆和胸水样本
        2.1.2 试剂及耗材
        2.1.3 设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 血浆和胸水样本循环DNA的提取
        2.2.2 基于ddPCR的EGFR-T790M突变检测分析
        2.2.3 统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 线性范围
        2.3.2 空白检测限
        2.3.3 分析特异度
        2.3.4 分析灵敏度
        2.3.5 重复性
        2.3.6 批间精密度
        2.3.7 准确度
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
    附图表
        附图
        附表
第3章 非小细胞肺癌唾液cfDNA检测的应用
    3.1 实验材料
        3.1.1 临床血浆和唾液样本
        3.1.2 试剂及耗材
        3.1.3 设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 血浆和唾液样本循环DNA的提取
        3.2.2 基于qPCR的cfDNA含量测定
        3.2.3 基于ddPCR的cfDNA-EGFR基因突变检测分析
        3.2.4 统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 唾液cfDNA含量在NSCLC诊断中的可行性研究
        3.3.2 唾液与血液cfDNA-EGFR突变检测的一致性分析
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
    附图表
        附图
        附表
总结与展望
参考文献
致谢
攻读学位期间发表及录用学术论文
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：3999291