毛兰素调控IDO诱导的小鼠Lewis肺癌细胞血管生成研究

发布时间：2017-06-02 07:14

  本文关键词：毛兰素调控IDO诱导的小鼠Lewis肺癌细胞血管生成研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肿瘤血管生成是肿瘤生长转移过程中的重要环节,为实体肿瘤的生长输送必需的营养物质。目前抑制肿瘤血管生成已经成为临床上治疗非小细胞肺癌的一个重要手段,并取得了一定的疗效。毛兰素是从石斛中分离得到的联苄类天然产物,其抗肿瘤血管生成活性已被报道。IDO在癌症发病机制中调节异常。虽然目前对于IDO的研究主要围绕其免疫学功能,但IDO在血管生成等非免疫学方面也起到了相当重要的作用。因此本课题旨在将毛兰素与IDO联系起来,探讨毛兰素能否通过调控IDO的表达来发挥其抗血管生成作用,为肺癌的抗血管生成治疗提供理论依据。我们首先检测了IDO过表达对小鼠Lewis肺癌细胞生物学行为的影响。研究表明IDO能够增加2LL细胞的贴壁性,促进2LL细胞浸润转移及血管生成拟态,并增强血管内皮细胞依赖性的血管生成。接下来我们通过Western blot、Real-time PCR及HPLC实验研究了毛兰素对IDO的调控作用,发现毛兰素可以明显下调细胞中IDO在蛋白及mRNA水平的表达,并抑制了IDO的酶活性。在明确了毛兰素对IDO的作用效果后,我们进行了Transwell实验,结果显示毛兰素显著抑制了IDO诱导的2LL细胞侵袭及转移能力。血管生成实验表明毛兰素不仅能够抑制IDO引起的内皮细胞血管生成,还能抑制2LL-IDO细胞的血管生成拟态。最后,我们检测了毛兰素对IDO诱导的血管生成过程中关键信号分子表达的影响,发现毛兰素可能是通过阻断JAK2/STAT3的磷酸化,下调其下游靶基因MMP-2和MMP-9的表达,并减少IDO介导的炎症介质COX-2、HIF-1α及IL-6的表达,从而对IDO诱导的血管生成产生抑制作用。综上所述,毛兰素可能是通过下调IDO的表达来抑制IDO诱导的血管生成,从而发挥其抗肿瘤血管生成的功效。本研究为有效切断肿瘤血供奠定了基础,为癌症治疗提供了方向。
【关键词】：血管生成 毛兰素 吲哚胺2 3-双加氧酶(IDO) 肺癌
【学位授予单位】：华东理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-22
• 1.1 研究背景11
• 1.2 鼓槌石斛研究概况11-13
• 1.2.1 鼓槌石斛的生药学研究11
• 1.2.2 鼓槌石斛的化学成分11-12
• 1.2.3 鼓槌石斛的药理学作用12-13
• 1.2.4 鼓槌石斛中有效成分毛兰素的药理学研究13
• 1.3 肿瘤血管生成概述13-18
• 1.3.1 肿瘤与血管生成13-16
• 1.3.2 肿瘤血管生成拟态16
• 1.3.3 肿瘤血管生成抑制剂研究16-18
• 1.4 IDO概述18-20
• 1.4.1 IDO的生物学特性18
• 1.4.2 癌症发病机制中IDO调节异常18-20
• 1.5 研究目标、内容、创新点和意义20-22
• 1.5.1 研究目标20
• 1.5.2 研究内容20-21
• 1.5.3 创新点21
• 1.5.4 研究意义21-22
• 第2章 实验材料与方法22-32
• 2.1 实验材料22-24
• 2.1.1 细胞株22
• 2.1.2 实验药物22
• 2.1.3 实验试剂22-24
• 2.2 仪器与设备24-25
• 2.3 常用试剂的配制25-28
• 2.4 实验方法28-32
• 2.4.1 细胞传代、冻存与复苏28
• 2.4.2 细胞计数28-29
• 2.4.3 细胞总蛋白的提取及定量29
• 2.4.4 蛋白免疫印迹(Western Blot)29-30
• 2.4.5 细胞总RNA的提取30
• 2.4.6 琼脂糖凝胶电泳30-32
• 第3章 IDO过表达对小鼠Lewis肺癌细胞生物学行为的影响32-42
• 3.1 前言32
• 3.2 实验材料32-33
• 3.2.1 细胞株32
• 3.2.2 主要试剂32-33
• 3.2.3 主要设备33
• 3.3 实验方法33-36
• 3.3.1 生长曲线的测定33
• 3.3.2 Transwell迁移实验33-34
• 3.3.3 Transwell侵袭实验34
• 3.3.4 血管生成实验34
• 3.3.5 血管生成拟态实验34
• 3.3.6 Western blot实验34
• 3.3.7 总RNA反转录34-35
• 3.3.8 PCR扩增目的基因35-36
• 3.3.9 统计学分析36
• 3.4 实验结果36-41
• 3.4.1 2LL-IDO细胞中IDO过表达的验证36-37
• 3.4.2 IDO过表达对2LL细胞形态的影响37-38
• 3.4.3 IDO过表达对2LL细胞增殖能力的影响38
• 3.4.4 IDO过表达对2LL细胞浸润转移能力的影响38-39
• 3.4.5 IDO过表达对HUVEC细胞血管生成能力的影响39-40
• 3.4.6 IDO过表达对2LL细胞血管生成拟态的影响40-41
• 3.5 讨论41-42
• 第4章 毛兰素对IDO过表达小鼠Lewis肺癌细胞中IDO的调控作用42-49
• 4.1 前言42
• 4.2 实验材料42-43
• 4.2.1 细胞株42
• 4.2.2 主要试剂42
• 4.2.3 主要设备42-43
• 4.3 实验方法43-45
• 4.3.1 MTT实验43
• 4.3.2 Western blot实验43
• 4.3.3 Real-time PCR实验43-44
• 4.3.4 高效液相色谱44-45
• 4.3.5 统计学分析45
• 4.4 实验结果45-48
• 4.4.1 毛兰素对2LL-IDO及正常LO2细胞存活率的影响45
• 4.4.2 毛兰素对2LL-IDO细胞中IDO表达的影响45-47
• 4.4.3 毛兰素对2LL-IDO细胞中IDO酶活性的影响47-48
• 4.5 讨论48-49
• 第5章 毛兰素调控IDO诱导的浸润转移及血管生成49-54
• 5.1 前言49
• 5.2 实验材料49
• 5.2.1 细胞株49
• 5.2.2 主要试剂49
• 5.2.3 主要设备49
• 5.3 实验方法49-50
• 5.3.1 Transwell迁移实验49-50
• 5.3.2 Transwell侵袭实验50
• 5.3.3 血管生成实验50
• 5.3.4 血管生成拟态实验50
• 5.3.5 统计学分析50
• 5.4 实验结果50-53
• 5.4.1 毛兰素抑制IDO诱导的2LL细胞浸润转移50-51
• 5.4.2 毛兰素抑制IDO诱导的HUVEC细胞血管生成51-52
• 5.4.3 毛兰素抑制IDO诱导的2LL细胞血管生成拟态52-53
• 5.5 讨论53-54
• 第6章 毛兰素调控IDO诱导的血管生成研究54-60
• 6.1 前言54
• 6.2 实验材料54-55
• 6.2.1 细胞株54
• 6.2.2 主要试剂54-55
• 6.2.3 主要设备55
• 6.3 实验方法55
• 6.3.1 Western blot实验55
• 6.3.2 Real-time PCR实验55
• 6.3.3 统计学分析55
• 6.4 实验结果55-59
• 6.4.1 毛兰素调控IDO诱导的肿瘤血管生成过程中关键分子的表达55-57
• 6.4.2 毛兰素调控IDO诱导的炎性微环境中关键分子的表达57-59
• 6.5 讨论59-60
• 第7章 结论60-61
• 参考文献61-70
• 致谢70-71
• 发表论文情况71

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王淑美,徐晓玉,张文亮;调控血管生成中药的研究现状[J];时珍国医国药;2004年09期

2 王国庆,易成,周宏远;因特网上的血管生成研究资源[J];中国微循环;2004年04期

3 练燕;抑制血管生成:第五类抗癌疗法?[J];国外医学.护理学分册;2004年10期

4 金艳,王秀琴;血管生成与抗血管生成策略[J];食品与药品;2005年09期

5 贾林,袁世珍;肿瘤抗血管治疗现状与血管生成抑制-细胞毒疗法[J];广州医学院学报;2000年02期

6 方全;血管生成素与肿瘤新生血管生成[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2001年05期

7 曹健,郭德玉,张恩娟;血管生成与疾病治疗[J];中国药房;2001年07期

8 王国庆,易成;血管形成新方式——拟血管生成[J];国外医学(肿瘤学分册);2003年04期

9 邹戈;肿瘤血管生成与抗血管生成研究进展[J];国外医学.泌尿系统分册;2003年01期

10 张天飞,蒋登金,郭光金;血管内皮生长因子与血管生成的研究进展[J];局解手术学杂志;2003年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 马强;陈刚;徐晓玉;;中药对血管生成影响研究进展[A];全国第3届临床中药学学术研讨会论文集[C];2010年

2 林秀坤;;新生血管生成与靶向抗肿瘤海洋药物的研制策略[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年

3 战忠利;孙蕾娜;孙慧;贾春实;;肺癌血管生成与血管生成抑制物之间相互关系的研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

4 战忠利;;肺癌血管生成与血管生成抑制物之间相互关系的研究[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年

5 刘丽华;易爱纯;;抗血管生成与血管依赖性实体瘤的治疗[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年

6 刘丽华;易爱纯;;抗血管生成与血管依赖性实体瘤的治疗[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

7 李平;王国庆;;血管靶向及抗血管生成联合放射治疗的研究进展[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

8 卞修武;;癌症和慢性炎症血管生成的调控差异及其治疗学意义[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 李龙江;温玉明;王昌美;陈江;;抑制血管生成诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究[A];第一届全国口腔颌面部肿瘤学术会议论文汇编[C];2001年

10 沈明秀;王凯;蔡连香;岳开琴;张树成;李巧风;陈秋梅;;试探中医血足则子宫易于容物的内涵实验之一血管生成[A];全国第六届中西医结合妇产科学术会议论文及摘要集[C];2002年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 王迪;血管生成药等待发力[N];医药经济报;2007年

2 丁志山 沃兴德;中药对血管生成影响的研究进展[N];中国医药报;2003年

3 徐蓓;血管生成：从药用植物到血管的研究 Angiogenesis:From Plants to Blood Vessels[N];中国医药报;2006年

4 白冰　编译;癌细胞血管生成学说有新变化[N];中国医药报;2008年

5 刘道安;抑制肺癌血管生成“饿死”癌细胞[N];中国医药报;2002年

6 徐峰;肿瘤与血管生成息息相关[N];医药经济报;2001年

7 记者刘道安;中药对肺癌血管生成有抑制作用[N];中国中医药报;2002年

8 记者 白毅;miRNA在多糖介导的血管生成抑制中起重要作用[N];中国医药报;2014年

9 渔阳;抗血管生成类药物：有前瞻性的暴利领域[N];医药经济报;2006年

10 徐峰;肿瘤与血管生成息息相关[N];医药经济报;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王付海;T7肽通过下调Ang-2表达及联合3-MA发挥其抗血管生成的实验研究[D];山东大学;2015年

2 刘建昆;IL-17在结直肠癌血管生成中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2011年

3 王心华;力达霉素和大黄素的抗血管生成和抗转移作用及其机制研究[D];中国协和医科大学;2001年

4 张彦民;塔斯品碱抑制血管生成的作用及初步机制研究[D];西安交通大学;2008年

5 董豪杰;血管生成素对miR-141的调控作用及其在血管生成中的功能[D];浙江大学;2014年

6 王婷;咖啡酸苯乙酯抗氧化、促氧化及抗血管生成相关机制的研究[D];兰州大学;2007年

7 房长存;基质金属蛋白酶8在血管生成中的作用机制研究[D];山东大学;2013年

8 甄红英;抗肿瘤抗生素C1027抑制血管生成和肿瘤转移及其作用机制研究[D];中国协和医科大学;1997年

9 朱珂;ATF4调节骨血管生成的作用和机制的研究[D];南开大学;2013年

10 孟繁平;Raf-1在胃癌及其血管生成中的作用及分子机制研究[D];第四军医大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘玉芝;含硒复合物对犬乳腺肿瘤细胞CTM1211的生长抑制和血管生成相关因子的调节作用[D];华中农业大学;2015年

2 荣倩倩;参芪抑瘤方对荷瘤小鼠H_(22)肝癌的抑制作用及抗血管生成机制研究[D];甘肃中医药大学(原名：甘肃中医学院);2015年

3 闫锴;血管生成素-2（Angiopoietin-2）调节小鼠下肢缺血血管生成的研究[D];四川医科大学;2015年

4 于玲;远隔预处理对大鼠脑缺血后血管生成及其相关因子表达影响的研究[D];复旦大学;2014年

5 陈士雯;MiR-494调控蜕膜MSCs影响子痫前期发病的机制研究[D];南京大学;2015年

6 丁s，

本文编号：414529