地西他滨与硼替佐米联合治疗急性T淋巴细胞白血病的机制研究

发布时间：2017-06-22 06:12

  本文关键词：地西他滨与硼替佐米联合治疗急性T淋巴细胞白血病的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：白血病是血液系统的一种恶性疾病,病情险恶,严重威胁人类的健康。白血病细胞由于自我更新能力增强,增殖失控,分化障碍,凋亡受阻,侵袭并破坏人类各脏器系统。随着科学技术的进步,目前对白血病的认识已更加深入、系统和全面,但仍存在许多亟待解决的问题,如：白血病起病的原因、发病机制、如何预防及彻底根治等。化疗和造血干细胞移植仍是目前白血病治疗的主要方法,随着多项新技术的开展,白血病的疗效得到了提升。如生物靶向治疗：抗CD20、 CD33、CD52的单克隆抗体,针对BCR/ABL、PML-RARa融合基因靶向药物的应用,凋亡调节因子的靶向治疗(针对bel-2)等,使白血病患者明显受益。尽管如此,但成人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的治疗目前仍缺乏有效的治疗手段,且预后差。我们实验室前期工作已证实硼替佐米可抑制急性T淋巴细胞白血病的肿瘤性增生,但移植后的致瘤小鼠最终仍死于白血病,考虑存在其它的致瘤机制,值得进一步探讨。寻找治疗急性T淋巴细胞白血病的新的作用靶点,具有重大意义。方法：CCK-8法检测去甲基化药物地西他滨或联合硼替佐米对Notch1高表达的急性T淋巴细胞白血病细胞株MOLT-4的增殖的影响Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡；PI染色检测细胞周期；二代测序／转录组高通量测序法筛选用药前后两组间差异基因；RT-PCR法检测Pax5. NF-κB(p65)及Notch1下游靶基因Hes1 mRNA的表达情况；构建携带Pax5过表达基因载体的慢病毒：侵染MOLT-4细胞；CCK-8法检测细胞增殖情况；RT-PCR法检测目的基因Pax5 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Notchl通路下游蛋白如Hes1及凋亡蛋白如Caspase3和Caspase9的表达量。结果：不同浓度的地西他滨作用于MOLT-4细胞4天,随着时间延长和剂量的加大,地西他滨对MOLT-4细胞株的增殖抑制作用越明显。Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡增多,PI染色检测检测G0/G1期细胞比例增多,细胞被阻滞在G0/G1期。且地西他滨与硼替佐米两药共同作用MOLT-4细胞比单用一种药物的抑制效果更明显。地西他滨对MOLT-4细胞增殖的作用结果显示0.5nmol/L地西他滨作用72小时后,MOLT-4细胞的增殖活力为对照组的30.2±2.2%(P0.01)。以此细胞为实验对象,与未加药处理的MOLT-4细胞对照,筛选两组间差异表达基因。筛选结果显示Pax5Sfrp2、Sulfl基因的表达量较用药前升高,进一步PT-PCR验证Pax5mRNA表达量较用药前升高更明显。构建携带Pax5高表达载体的慢病毒导入MOLT-4细胞,细胞的增殖变缓,增殖活力下降。蛋白免疫印迹法(Western blot)结果显示Notch1通路下游蛋白Hes1的表达量减少,凋亡蛋白Caspase3和Caspase9表达量增加。结论：地西他滨联合硼替佐米较单药能更有效抑制MOLT-4细胞的增殖,诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期于GO/G1期。其可能机制是促进了Pax5的高表达,抑制T细胞特异性的Notch1信号通路,从而抑制肿瘤生长。
【关键词】：地西他滨 硼替佐米 MOLT-4细胞 急性T淋巴细胞白血病 Pax5 Notch1
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 中英文缩略词汇表9-10
• 前言10-14
• 参考文献11-14
• 第一部分14-32
• 材料与方法15-22
• 结果22-27
• 讨论27-28
• 参考文献28-32
• 第二部分32-47
• 材料与方法33-37
• 结果37-43
• 讨论43-44
• 参考文献44-47
• 第三部分47-65
• 材料与方法47-57
• 结果57-62
• 讨论62-63
• 参考文献63-65
• 结论65-66
• 综述66-73
• 参考文献70-73
• 在读期间发表论文73-74
• 致谢74

【共引文献】

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1 徐艳玲;Pax5基因在急性淋巴细胞白血病中突变、缺失的相关研究[D];华中科技大学;2013年

  本文关键词：地西他滨与硼替佐米联合治疗急性T淋巴细胞白血病的机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：470927