低氧对肝癌HepG2细胞HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表达及增殖能力的影响

发布时间：2017-06-29 08:06

  本文关键词：低氧对肝癌HepG2细胞HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表达及增殖能力的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：1目的利用氯化钴(CoCl2)建立肝癌HepG2细胞的体外低氧模型,观察不同时间段的肝癌HepG2细胞在不同浓度CoCl2模拟的低氧化境中的增殖能力的变化,并讨论其可能的原因。测定不同程度低氧对肝癌HepG2细胞中蛋白HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax的表达情况,并考虑其原因和带来的生物学效应。2方法用不同浓度的CoCl2 (0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、 500μmol/L)模拟不同程度的低氧环境,在低氧环境中用不同的时间(12h、24h、 48h、 72h)培养肝癌HepG2细胞,诱导其缺氧,用CCK-8法检测不同程度低氧下HepG2细胞增殖能力的变化。用不同浓度的CoCl2 (0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、 500μmol/L)模拟不同程度的低氧环境,在低氧环境中培养肝癌HepG2细胞48h,通过蛋白印迹法(Western Blot, WB)测定低氧环境中细胞内HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。3结果经CCK-8法测定,结果示在一定浓度范围以内(≤100p,mol/L)的CoCl2对HepG2细胞增殖能力的影响不明显。当CoCl2浓度增加(≥200μmol/L)会抑制肝癌HepG2细胞的增殖能力,且浓度越高,抑制程度越强。经WB法检测,结果示HIF-1α蛋白在50μmol/L、100pμnol/L、200μmol/L、300μmol/L、 500μmol/L浓度组相对灰度值依次为(0.277±0.003)、(0.272±0.003)、(0.333±0.005)(0.364±0.003)、(0.366±0.008),与常氧组的相对灰度值(0.122±0.002)相比均有统计学意义(P0.05)；低氧组中,50pmol/L浓度组和100μmol/L浓度组之间、300μmol/L浓度组和500μmol/L浓度组的相对灰度值之间无统计学意义(P0.05),其他相邻组之间均有统计学意义(P0.05) 。VEGF蛋白在50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、 500μmol/L浓度组相对灰度值依次为(0.268±0.003)、(0.368±0.009)、(0.450±0.007)(0.535±0.010)、(0.584±0.015),与常氧组的相对灰度值(0.149±0.003)相比均有统计学意义(P0.05)；低氧组的相对灰度值与前一浓度组比较均有统计学意义(P0.05)。Bcl-2蛋白在50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L浓度组相对灰度值依次为(0.439±0.003)、(0.399±0.005)、(0.322±0.004)、(0.263±0.001)、(0.124±0.002),与常氧组的相对灰度值(0.445±0.003)相比差异均有统计学意义(P0.05)；低氧组的相对灰度值与前一浓度组比较均有统计学意义(P0.05)。Bax蛋白在50μmol/L、100μmol/L、 200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L浓度组相对灰度值依次为(0.362±0.005)、(0.455±0.007)、(0.480±0.009)、(0.506±0.006)、(0.541±0.014),与常氧组的相对灰度值(0.243±0.003)相比之间差异均有统计学意义(P0.05)；低氧组的相对灰度值与前一浓度组比较均有统计学意义(P0.05)。在低氧下细胞中的HIF-1α、VEGF、Bax蛋白的表达均增加,并且蛋白的表达程度与低氧程度成正比；Bcl-2蛋白在低氧下的表达受到抑制,并且蛋白的表达程度与低氧程度成反比。4结论通过不同浓度CoCl2建立肝癌HepG2细胞的体外低氧模型,一定浓度范围以内(≤100μmol/L)的CoCl2对HepG2细胞增殖能力的影响不明显,过高浓度的CoCl2 200μmol/L)会抑制HepG2细胞生长,且CoCl2浓度越高,抑制程度越强。CoCl2模拟的低氧环境可以诱导肝癌HepG2细胞的HIF-1α蛋白表达增强,同时使信号通路中位于HIF-1α下游的VEGF、Bax蛋白的表达增强,Bcl-2蛋白的表达减弱。
【关键词】：低氧 肝细胞癌 HIF-1α VEGF Bcl-2 Bax
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-7
• 英文缩略词表7-8
• 前言8-11
• 材料和方法11-17
• 实验结果17-22
• 讨论22-27
• 结论27-28
• 参考文献28-31
• 综述31-52
• 参考文献43-52
• 致谢52
• 攻读学位期间发表的学术论文目录52-53

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