轮枝孢菌素A抑制结肠癌细胞迁移的分子机制研究

发布时间：2017-07-01 04:02

  本文关键词：轮枝孢菌素A抑制结肠癌细胞迁移的分子机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：轮枝孢菌素A (Verticillin A)属二酮哌嗪类化合物,本文从蘑菇黄赭鹅膏菌(含菌寄生菌歪孢菌)中分离提取得到轮枝孢菌素A,具有抗肿瘤转移活性。肿瘤细胞转移是制约肿瘤治疗的一大障碍,找到一种能够抑制肿瘤细胞转移的药物将具有非常重大的意义。本文研究了轮枝孢菌素A抑制结肠癌细胞迁移的分子机制,通过细胞划痕实验、Transwell跨膜迁移实验发现轮枝孢菌素A在体外能有效抑制结肠癌细胞迁移,接着通过PCR、Western Blot等试验筛选细胞迁移相关的关键基因,找出轮枝孢菌素A的作用靶点为c-Met。进一步研究发现,轮枝孢菌素A通过c-Met调节下游PI3K-Akt和Ras/Raf-MAPK信号,进而抑制结肠癌细胞迁移。此外,在分子水平,轮枝孢菌素A能够有效阻碍肝细胞生长因子HGF激发的c-Met磷酸化作用。通过Transwell实验模拟体内肿瘤细胞迁移过程也发现轮枝孢菌素A能够有效逆转HGF诱导的细胞迁移运动。BAL B/c小鼠体内试验发现,轮枝孢菌素A单药抑制结肠癌细胞CT26肺部转移的效果不是很明显,但与TF RAIL配伍使用后,则可以有效抑制肿瘤细胞转移,抑制率近50%。这种药物协同作用的分子机制目前还不清楚,有待进一步研究。概括起来,轮枝孢菌素A能够有效抑制结肠癌细胞迁移运动能力,并通过抑制c-Met的表达来下调下游PI3K-Akt 和 Ras/Raf-MAPK信号通路,进而抑制肿瘤细胞迁移。本研究首次揭示了轮枝孢菌素A抑制肿瘤转移方面的作用,为今后轮枝孢菌素A作为候选抗癌药物更深远的开发研究提供理论支持。
【关键词】：轮枝孢菌素A 结肠癌 细胞迁移 c-Met
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 致谢8-9
• 缩略词表9-11
• 摘要11-12
• Abstract12-13
• 1 绪论13-25
• 1.1 肿瘤转移过程13
• 1.2 肿瘤细胞迁移的机制13-18
• 1.2.1 诱导肿瘤细胞运动的因素13-14
• 1.2.2 肿瘤细胞迁移的过程14-18
• 1.3 HGF/c-Met信号通路在肿瘤细胞迁移过程的研究进展18-22
• 1.3.1 HGF/c-Met在癌症中的表达18-19
• 1.3.2 上皮—间充质转移(EMT)与HGF/c-Met之间的关系19-20
• 1.3.3 HGF/c-Met信号20-22
• 1.4 轮枝孢菌素A的研究现状22-23
• 1.5 总结与展望23
• 1.6 本研究的研究目的与研究内容23-25
• 2 材料与方法25-38
• 2.1 材料25-29
• 2.1.1 主要仪器25
• 2.1.2 主要试剂及公司25-26
• 2.1.3 培养液、试剂和缓冲液的配制方法26-29
• 2.2 方法29-38
• 2.2.1 细胞培养29-30
• 2.2.2 细胞存活能力测试(MTT)30-31
• 2.2.3 细胞划痕实验31-32
• 2.2.4 Transwell细胞跨膜迁移实验32-33
• 2.2.5 RT-PCR实验33-34
• 2.2.6 实时定量PCR分析34-35
• 2.2.7 蛋白免疫印迹35-36
• 2.2.8 c-Met小RNA干扰36
• 2.2.9 BALB/c小鼠体内肿瘤转移实验36-37
• 2.2.10 统计分析37-38
• 3 结果与分析38-52
• 3.1 轮枝孢菌素A对肿瘤细胞增殖抑制的作用38
• 3.2 轮枝孢菌素A在体外有效抑制结肠癌细胞的迁移38-41
• 3.3 与肿瘤转移相关的关键基因筛选41-42
• 3.4 轮枝孢菌素A通过下调c-Met抑制结肠癌细胞的迁移42-45
• 3.5 轮枝孢菌素A通过c-Met调节的下游信号通路45-46
• 3.6 轮枝孢菌素A在转录水平下调c-Met表达46-47
• 3.7 轮枝孢菌素A抑制HGF诱导的Met磷酸化作用47-50
• 3.8 轮枝孢菌素A在体内抑制结肠癌细胞转移50-52
• 4 讨论52-54
• 5 全文总结及创新点54-55
• 5.1 全文总结54
• 5.2 创新点54-55
• 参考文献55-64
• 个人简历64

【共引文献】

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1 张可爽;c-met在大肠癌组织中的表达及与肿瘤血管生成的关系[D];青岛大学;2010年

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本文编号：504467