人肝癌组织中肝癌干细胞的分离培养与鉴定

发布时间：2017-07-06 11:23

  本文关键词：人肝癌组织中肝癌干细胞的分离培养与鉴定

  更多相关文章： 肝癌组织 肿瘤干细胞 CD133 CD90 裸鼠成瘤

【摘要】：目的体外分离及培养人肝癌组织中的肝癌干细胞并鉴定其生物学特性。方法收集临床肝癌患者术后肝癌组织,用酶消化法分离肝癌细胞,将其接种于无血清培养基中培养,并在超低粘附24孔板中观察肝癌干细胞克隆球生长情况;用MTT比色法检测肝癌干细胞增值能力;用肝癌干细胞表面标记物CD90、CD133抗体,采用流式细胞仪鉴定并分选CD90+细胞、CD90-细胞,CD133+细胞、CD133-细胞,将4种不同细胞组成CD90+细胞CD133+细胞、CD90-细胞CD133+细胞、CD133-细胞CD90+细胞及CD133-细胞CD90-细胞,分别接种于裸鼠皮下观察其成瘤能力并记录肿瘤体积;将裸鼠成瘤后的组织进行HE染色。结果在无血清培养基中,肝癌干细胞可以形成少量的细胞克隆球;MTT比色法检测,在连续72小时里,肝癌干细胞克隆球始终处于持续增值状态;采用流式细胞仪检测显示肝癌干细胞表面标记物CD90、CD133阳性率分别是7.2%、8.8%,并成功分选出CD90+细胞、CD90-细胞、CD133+细胞、CD133-细胞,将组成的4种不同细胞组分别接种于裸鼠皮下,结果显示,CD90+细胞CD133+细胞、CD90-细胞CD133+细胞及CD133-细胞CD90+细胞在裸鼠体内均形成肿瘤,且CD90+细胞CD133+细胞组在最短时间内出现了较高的致瘤能力。而CD133-细胞CD90-细胞在整个过程中未见肿瘤形成。将裸鼠体内的肿瘤经HE染色,其结果与人肝癌组织病理特点相似。结论成功建立了从人肝癌组织中分离培养肝癌干细胞的方法;培养得到的肝癌干细胞能在无血清培养基中形成克隆球,且具有较强的增值能力;部分细胞表达CD90+细胞和CD133+细胞,且在裸鼠体内形成肿瘤;肝癌组织中CD90+细胞和CD133+细胞具有肝癌干细胞特性,可能为肝癌干细胞。
【关键词】：肝癌组织 肿瘤干细胞 CD133 CD90 裸鼠成瘤
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-5
• 英文摘要5-7
• 符号说明7-9
• 前言9-13
• 第一部分人肝癌组织中肝癌干细胞分离培养与分选13-27
• 1 实验材料13-15
• 2 实验方法及步骤15-19
• 3 实验结果19-22
• 4 讨论22-27
• 第二部分裸鼠皮下人肝癌干细胞成瘤模型27-35
• 1 实验材料27
• 2 实验方法及步骤27-29
• 3 实验结果29-31
• 4 讨论31-35
• 结论35-36
• 参考文献36-41
• 综述41-55
• 综述参考文献51-55
• 致谢55-56
• 个人简介56

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 宋凯;杨硕菲;吴俊华;江春平;;肝癌干细胞的研究进展[J];世界华人消化杂志;2009年36期

2 严威;吴国洋;;肝癌干细胞分离鉴定研究进展[J];肝胆外科杂志;2010年03期

3 李广权;陈伟强;;肝癌干细胞的研究现状[J];医学综述;2013年03期

4 张朵;朱海英;马凤云;胡以平;;肝癌干细胞的研究现状[J];生命的化学;2006年01期

5 陈丽;戴广海;;肝癌干细胞研究现状[J];临床肿瘤学杂志;2008年12期

6 唐飞;吕洪敏;向慧玲;;肝癌干细胞的研究现状[J];实用肝脏病杂志;2008年02期

7 张伟;陈孝平;;肝癌干细胞的研究进展[J];临床外科杂志;2008年09期

8 张华;高志红;许田英;朱建凤;文家斌;张阳;;常规化疗对肝癌干细胞的作用[J];胃肠病学和肝病学杂志;2009年06期

9 徐文;曹璐;殷正丰;;肝癌干细胞研究进展与方向[J];癌症;2009年09期

10 孙力超;赵璇;遇珑;韩璐璐;刘彤;胡海;孙立新;杨治华;冉宇靓;;抗肝癌干细胞功能性单克隆抗体的研制[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2010年02期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 单娟娟;钱程;;悬浮条件培养法富集肝癌干细胞[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年

2 尹川;谢渭芬;;肝癌干细胞及其分化治疗[A];第九次全国消化系统疾病学术会议专题报告论文集[C];2009年

3 殷胜勇;陈新华;胡晨;;CD133阳性肝癌干细胞在肝癌肝移植术后肿瘤复发中的作用及纳秒脉冲进行干预的初步实验研究[A];2013中国器官移植大会论文汇编[C];2013年

4 杜智;宋文芹;张世光;高英堂;朱争艳;王毅军;只丹琮;;人原发性肝癌细胞建系及其生物学特性的初步鉴定[A];天津市生物医学工程学会2007年学术年会论文摘要集[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 本报记者 王雪敏;肝癌干细胞及其分化治疗[N];医药经济报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 雷增杰;组蛋白去甲基化酶LSD1促进肿瘤细胞“干性”和侵袭转移的机制研究[D];第三军医大学;2015年

2 张克志;三氧化二砷抑制GLI1表达诱导肝癌干细胞分化延长术后生存期的实验研究[D];复旦大学;2014年

3 张华;肝癌干细胞的鉴定及化疗对肝癌干细胞作用的研究[D];大连医科大学;2009年

4 黎江;肝癌干细胞新型培养体系的建立以及治疗靶点筛选[D];第二军医大学;2012年

5 郭哲;环氧化酶-2对肝癌干细胞生物学特性的影响及机制研究[D];广西医科大学;2015年

6 刘卫辉;大鼠肝干细胞和肝癌干细胞间生物学特性差异分析及相关分子调控机制研究[D];第四军医大学;2012年

7 朱政;肝癌干细胞表面标志物的鉴定与特性研究[D];复旦大学;2009年

8 孙岚;ACNP-MET纳米药物递送系统及其对肝癌干细胞靶向性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年

9 刘丽梅;去乙酰化酶SIRT1在肝癌干细胞自我更新中的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2013年

10 沈俊杰;Nanog阳性肝癌细胞在肝癌干细胞层级分化中的地位与作用研究[D];第三军医大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 马俊明;人肝癌组织中肝癌干细胞的分离培养与鉴定[D];宁夏医科大学;2015年

2 曹璐;球培养法富集肝癌干细胞样亚群及其特征鉴定[D];第二军医大学;2010年

3 杨军;肝癌干细胞特异性标志物的实验研究及其临床病理联系[D];中南大学;2009年

4 常文娟;低剂量顺铂富集肝癌干细胞的实验研究[D];大连医科大学;2011年

5 容雁;抗人肝癌干细胞功能性单抗的研究[D];广西医科大学;2012年

6 陶璐;基于肿瘤耐药特性构建肝癌干细胞富集模式的实验研究[D];广西医科大学;2012年

7 王云霞;人肝癌干细胞单抗抑制肝癌的生长和转移[D];北京协和医学院;2012年

8 曲平波;靶向肝癌干细胞的细胞毒性T淋巴细胞的研究[D];第二军医大学;2013年

9 闫伟伟;肝癌干细胞表面标志物的初步筛查及其临床应用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年

10 赵璇;抗人肝癌干细胞功能性抗体及靶抗原的研究[D];中国协和医科大学;2010年

，

本文编号：526019