肿瘤转移相关基因1（MTA1）在食管癌细胞上皮间质转化过程中的促进作用 干细胞培养基成球培养法筛选宫颈癌干细胞的生物学特
发布时间：2017-07-06 13:18
本文关键词：肿瘤转移相关基因1（MTA1）在食管癌细胞上皮间质转化过程中的促进作用 干细胞培养基成球培养法筛选宫颈癌干细胞的生物学特性鉴定
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【摘要】：目的探讨MTA1基因对食管癌细胞上皮间质化(EMT)过程的影响及分子机制。方法采用慢病毒感染方法建立MTA1敲降的食管癌细胞系LV3-shMTA1-KYSE410及MTA1过表达食管癌细胞系LV5-MTA1-KYSE450;通过Western Blot方法检测上述食管癌细胞系中MTA1蛋白及EMT相关蛋白的表达水平；进而采用免疫荧光实验检测上述食管癌细胞系中EMT相关蛋白分子标志物E-cadherin和Vimentin的定位以及表达水平的变化；应用划痕实验明确MTA1表达水平改变后对食管癌细胞迁移能力的影响；在LV3-shMTA1-KYSE410细胞中过表达SOX2观察对敲降MTA1的KYSE410细胞EMT的影响；采用免疫组织化学方法检测食管癌组织中MTA1和SOX2的表达情况,分别统计分析二者的临床病理参数及预后的相关性,并探讨MTA1和SOX2分子表达的相关性。结果食管癌KYSE450细胞系过表达MTA1后,EMT相关蛋白标志物中的E-cadherin表达水平降低而Vimentin表达水平升高,迁移能力增强；食管癌KYSE410细胞系敲降MTA1后,E-cadherin表达水平升高而Vimentin表达水平降低,迁移能力降低,差异均具有统计学意义(P0.05)=LV3-shMTA1-KYSE410细胞过表达SOX2后能够恢复由于MTA1的敲降所引起的E-cadherin表达水平的升高、Vimentin表达水平的降低以及迁移能力的减弱。通过免疫组化结果分析得出,MTAl和SOX2在肿瘤组织中的表达强度均高于正常组织(p0.05)。MTA1和SOX2的表达强度均与淋巴结转移相关(p0.05)。MTA1阳性、SOX2阳性及二者共同阳性表达的患者的生存时间均短于阴性表达的患者(p0.05)。SOX2的表达与MTA1存在相关性(p0.05)。结论敲降MTAl可抑制食管癌细胞的间质化、降低食管癌细胞的迁移能力,这可能与SOX2表达的降低有关。MTA1和SOX2在食管癌中的过表达提示食管癌预后的不良。目的 识别和描述CaSki细胞中的肿瘤干细胞群特征。方法 使用干细胞培养基悬浮培养法筛选和培养肿瘤干细胞样细胞球。利用含10%胎牛血清的培养基培养肿瘤干细胞球,观察其分化情况。鉴定已知的干性标志性分子标志物：OCT4、SOX2。应用Target Region Amplified Polymorphism-Polymerase Chain Reaction (TRAP-PCR)实验检测宫颈癌干细胞的端粒酶活性。通过Western Blot实验检测多药转运蛋白ABCG2的表达以及药物杀伤实验验证宫颈癌干细胞的耐药性。通过Transwell实验检测宫颈癌干细胞的侵袭转移能力。结果干细胞培养基悬浮细胞培养法能够成功富集到肿瘤干细胞球,这些肿瘤细胞球可被认为是宫颈癌癌细胞中的肿瘤干细胞。通过检测肿瘤干细胞球与贴壁的干性标志分子物的表达发现,宫颈癌干细胞球高表达干性标志性分子标志物OCT4和SOX2。通过检测宫颈癌干细胞球与贴壁细胞的端粒酶活性发现,宫颈癌干细胞球的端粒酶活性高于贴壁细胞的端粒酶活性。通过检测宫颈癌干细胞球和贴壁细胞的ABCG2的表达发现,宫颈癌干细胞球高表达多药转运蛋白ABCG2。通过药物杀伤实验证实宫颈癌干细胞球相对于贴壁细胞具有更强的耐药性。通过Transwell实验证实宫颈癌干细胞球比贴壁细胞具有更强的侵袭转移能力。结论悬浮细胞球培养法富集的肿瘤干细胞具有更强的增殖、侵袭和耐药性。
【关键词】：MTA1 SOX2 食管癌 EMT 肿瘤干细胞 宫颈癌 肿瘤转移 细胞凋亡 肿瘤耐药
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：
- 中英文缩略词对照7-8
- 第一部分8-59
- 中文摘要9-10
- 英文摘要10-11
- 前言11-13
- 材料与方法13-30
- 结果30-51
- 讨论51-55
- 小结55-56
- 参考文献56-59
- 第二部分59-79
- 中文摘要60-61
- 英文摘要61-62
- 前言62-63
- 材料与方法63-69
- 结果69-74
- 讨论74-76
- 小结76-77
- 参考文献77-79
- 基金资助79-80
- 已发表文章80-81
- 文献综述81-89
- 参考文献85-89
- 致谢89-90
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本文编号：526390
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