二甲双胍调节脂肪细胞对白血病细胞的化疗保护作用及机制研究

发布时间：2017-07-06 21:13

  本文关键词：二甲双胍调节脂肪细胞对白血病细胞的化疗保护作用及机制研究

  更多相关文章： 急性髓系白血病 脂肪细胞 二甲双胍 化疗保护

【摘要】：目的:急性髓系白血病(AML)恶性程度高、预后差,与其骨髓微环境密切相关。脂肪细胞作为微环境中重要组分,参与白血病发生发展,但有关骨髓原位脂肪细胞的作用研究仍存在诸多盲点。二甲双胍是广泛应用的口服降糖药物,被研究证实可通过抑制脂肪生成,阻断实体肿瘤细胞增殖与转移,但其能否调控白血病骨髓脂肪细胞作用尚未见相关报道。本研究对初发AML及正常者骨髓活检切片进行回顾性分析,运用计算机网格计点法精确定量骨髓脂肪细胞特征,初步探讨骨髓原位脂肪细胞与成人AML难治间的相关性。体外诱导白血病患者骨髓间充质干细胞(MSC)成脂分化,明确其对白血病细胞的化疗保护及可能作用机制;与此同时,给予二甲双胍干预,探讨二甲双胍对脂肪细胞调控白血病细胞抵抗化疗的影响,为白血病靶向治疗提供新思路。方法:(1)建立自主研发计算机网格计点软件,检测61例初发AML患者与71例临床诊断正常者骨髓脂肪细胞特征(含量及大小),比较两组间差异;并依据预后将初发AML患者分为缓解组及难治组,分析骨髓脂肪细胞特征与AML难治性的相关性。(2)将初发AML及正常者骨髓MSC诱导成脂分化,油红染色观察脂肪细胞形态,q RT-PCR检测成脂基因(PPARγ、C/EBPα、FABP4)的表达,验证脂肪细胞形成。(3)构建脂肪细胞与THP-1细胞共培养体系,筛选阿糖胞苷(Ara-c)最佳作用浓度,研究初发AML与正常者骨髓MSC衍生脂肪细胞对白血病细胞化疗敏感性的差别;蛋白芯片技术检测AML骨髓上清上调蛋白并根据调变程度及文献选择脂肪因子;Western Blot结合q RT-PCR验证两组患者骨髓MSC衍生脂肪细胞中调变蛋白表达情况。(4)初发AML患者骨髓MSC诱导形成脂肪细胞,与第19天加入5mmol/L二甲双胍进行干预48h,并设立对照组。油红染色观察两组成脂率,q RT-PCR检测成脂基因PPARγ、C/EBPα、FABP4m RNA表达水平差异;在Ara-c作用下,建立白血病细胞系(THP-1)与脂肪细胞的直接共培养模型,通过细胞计数比较两组对白血病细胞系化疗保护的差异,流式细胞术检测THP-1凋亡变化。(5)收集二甲双胍调节的脂肪细胞上清(met-CM)与未加入二甲双胍脂肪细胞上清(control-CM),上清液与肿瘤细胞常规培养基按不同比例稀释后重悬白血病细胞,同时加入化疗药物Ara-c,48h后研究各比例状态下THP-1的存活数;比较二甲双胍处理与未处理的脂肪细胞对白血病细胞化疗敏感性的影响。(6)Western Blot及q RT-PCR法检测二甲双胍处理前后组脂肪细胞Leptin因子蛋白及m RNA表达水平,明确Leptin在二甲双胍调控白血病脂肪细胞化疗保护中的作用。结果:(1)AML初发患者骨髓脂肪细胞较正常者含量少、体积小(P0.0001);难治组AML患者骨髓脂肪含量比非难治组减少(P0.05)。此外,骨髓脂肪含量与患者年龄正相关,与骨髓原始细胞量、性别、BMI均无相关性;(2)在Ara-c的作用下,AML骨髓MSC体外诱导分化的脂肪细胞与THP-1共培养,与正常组相比,THP-1细胞对化疗药敏感性明显降低,细胞存活数显著升高(P0.001);(3)蛋白芯片技术检测发现AML骨髓上清高分泌脂肪因子Leptin、Resistin和Growth Hormone。而Leptin在初发AML患者骨髓MSC衍生脂肪细胞中表达明显增高(P0.001);(4)与对照组相比较,AML骨髓MSC衍生脂肪细胞经二甲双胍处理后,成脂率、成脂基因表达水平无明显改变(P0.05);但与THP-1直接或间接共培养,均可降低THP-1化疗的抵抗性,促进THP-1细胞凋亡(P0.05);(5)二甲双胍可以降低脂肪细胞Leptin蛋白及m RNA表达水平(P0.01)。结论:1.AML患者骨髓脂肪细胞含量少,体积小,参与AML化疗抵抗,与其难治性密切相关;异常高分泌的脂肪因子Leptin可能是调控骨髓脂肪细胞保护白血病免受化疗损伤的机制。提示骨髓脂肪细胞可作为初发AML患者预后不良的一个重要因素,深入研究其作用机制可指导临床早期干预治疗。2.二甲双胍可降低AML骨髓脂肪细胞对肿瘤细胞抵抗化疗的保护作用。其可能机制一方面在于降低脂肪上清中脂肪因子Leptin的分泌;另一方面在于降低了脂肪细胞对肿瘤细胞的抗凋亡作用。
【关键词】：急性髓系白血病 脂肪细胞 二甲双胍 化疗保护
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 第一部分 骨髓脂肪细胞与AML难治的相关性分析及其可能机制15-49
• 引言15-16
• 材料和方法16-34
• 结果34-46
• 讨论46-49
• 第二部分 二甲双胍抑制AML骨髓脂肪细胞对白血病细胞化疗保护的作用及机制研究49-72
• 引言49-50
• 材料与方法50-63
• 结果63-69
• 讨论69-72
• 全文结论72-73
• 参考文献73-78
• 致谢78-81
• 学位期间发表的学术论文目录81

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱晓海;脂肪细胞培养[J];实用美容整形外科;1994年02期

2 ;脂肪细胞也会更新换代[J];祝您健康;2009年09期

3 ;关于脂肪细胞的新发现可能有助于减肥[J];中华医学信息导报;2003年03期

4 刘婕婷;刘毅;;脂肪细胞的研究进展[J];中国美容医学;2007年02期

5 ;脂肪细胞也有抗炎作用[J];中国医院用药评价与分析;2008年06期

6 信延宁;张海峰;;运动对脂肪细胞体积和数目的影响[J];中国运动医学杂志;2011年12期

7 ;科学家新分离出的脂肪细胞可能对肥胖治疗有益[J];微循环学杂志;2012年03期

8 夏雷;张奇志;张亚楠;;脂肪细胞间信息通讯的多种机制[J];医学研究杂志;2012年11期

9 朱政,孙册,沈昭文;脂肪细胞膜凝集素的初步研究[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1984年09期

10 ;上海第二医科大学一项研究否定成人脂肪细胞不增殖观点[J];河北职工医学院学报;1995年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 温宇;杨姗姗;胡秀芬;卢慧玲;刘婧;;脂肪酸诱导脂肪细胞促酰化蛋白抵抗及机制研究[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

2 何玉秀;陈龙浩;张海峰;信延宁;;对脂肪细胞数目和体积测算方法的比较研究[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年

3 周虎;洪尚宇;廖侃;夏其昌;曾嵘;;3T3-L1脂肪细胞及前脂肪细胞的分泌蛋白质的大规模鉴定[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

4 汤其群;;脂肪细胞的发育分化与肥胖的防治[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年

5 逯伟达;Hengwei Zhang;Yingchun Zhao;Rui Cao;Peijing Rong;Weikuan Gu;Jing Xiao;Dengshun Miao;Joan Lappe;Robert Recker;高海青;Gary Guishan Xiao;;人骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞在成骨细胞发生过程中抑制作用机制的研究[A];中华医学会第三次骨质疏松和骨矿盐疾病中青年学术会议论文汇编[C];2011年

6 钱凤芹;刘国霞;;猪脂肪细胞膜免疫调控的研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年

7 马晓莉;母义明;汪保安;窦京涛;陆菊明;潘长玉;;LRP16基因增加脂肪细胞胰岛素抵抗机制的研究[A];2008中国医师协会内分泌代谢科医师分会年会论文汇编[C];2008年

8 陈思思;王彦;杨静;陈显久;廉如;;gAd对3T3-L1脂肪细胞IR模型糖摄取的影响及其机制研究[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

9 丁晓颖;彭永德;董维平;王煜非;潘晓洁;刘尚全;杨颖;;脂肪细胞对共培养体系胰岛素靶细胞胰岛素受体后信号转导影响的实验研究[A];2006年中华医学会糖尿病分会第十次全国糖尿病学术会议论文集[C];2006年

10 彭永德;丁晓颖;董维平;王育瑶;王煜非;程群;江博仁;杨颖;;炎症通路激活状态对3T3L1脂肪细胞胰岛素信号转导的影响[A];2008内分泌代谢性疾病系列研讨会暨中青年英文论坛论文汇编[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 惠 丛;科学家为脂肪细胞平反[N];中国质量报;2004年

2 朱抗美（教授）;脂肪细胞与肥胖[N];上海中医药报;2002年

3 李学梅;减肥易反弹,原是脂肪细胞“复活”[N];新华每日电讯;2008年

4 夏;脂肪细胞庇护结核菌[N];健康报;2007年

5 刘国信;适度丰满有益健康[N];中国中医药报;2005年

6 刘元江;减肥之路,为何如此艰难？[N];医药经济报;2008年

7 晓芙;塑造理想的腰腹曲线[N];甘肃经济日报;2000年

8 储国强 支勇平;我国科学家发现调控猪肉肥瘦机理[N];新华每日电讯;2003年

9 中华医学会北京分会 方红娟;女性的脂肪细胞比男性多[N];健康报;2011年

10 兰政文;减肥新思路：以“补”瘦身[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 马世瞻;促甲状腺激素通过甘油磷酸酰基转移酶3调节甘油三酯合成[D];山东大学;2015年

2 刘品;草鱼脂肪细胞发育及HUFA对其影响的研究[D];西北农林科技大学;2015年

3 余文;脂肪细胞及脂肪因子调控多发性骨髓瘤细胞增殖和耐药的研究[D];华中科技大学;2015年

4 毋文静;CTRP6调控猪脂肪细胞成脂的作用与机制[D];西北农林科技大学;2016年

5 姜冬青;促甲状腺激素通过PKA通路抑制3T3-L1脂肪细胞中脂肪甘油三酯脂酶的表达[D];山东大学;2016年

6 杨蕾;miR-1908在人脂肪细胞中的功能研究[D];南京医科大学;2016年

7 钟巧青;高密度脂蛋白对炎性脂肪细胞功能的影响[D];中南大学;2007年

8 董劭壮;炎症对脂肪细胞功能的影响及其机制探讨[D];中南大学;2007年

9 于莉莉;模式识别受体介导的脂肪细胞天然抗病毒反应[D];北京协和医学院;2014年

10 叶峰;3T3-L1细胞分化为脂肪细胞的蛋白质组学及其部分相关蛋白功能的研究[D];中南大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张燕;IL-18、TNF-α对3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞慢性炎症作用的初步研究[D];蚌埠医学院;2015年

2 张艳艳;CD36在高脂诱导的小鼠脂肪组织代谢性炎症中的作用[D];重庆医科大学;2015年

3 赵志武;PLIN1基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响及机制探究[D];山西医科大学;2016年

4 张力翔;维生素D及其受体与脂肪细胞脂质代谢关系的研究[D];南京医科大学;2013年

5 王慧;二甲双胍调节脂肪细胞对白血病细胞的化疗保护作用及机制研究[D];上海交通大学;2015年

6 蒋云;可溶性环氧化物水解酶抑制剂对脂肪细胞脂质代谢及分泌功能的影响[D];中南大学;2010年

7 王慧;黄连五种单体对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响及机制研究[D];第三军医大学;2012年

8 丁亚琴;rVisfatin干预人脂肪细胞的功能研究[D];南京医科大学;2008年

9 白亮;Sirt1在猪脂肪细胞增殖分化过程中的调控作用[D];西北农林科技大学;2007年

10 汤莎莎;促甲状腺激素对脂肪细胞促炎症因子分泌的影响[D];天津医科大学;2013年

，

本文编号：527779