AFP单抗修饰的载DCN PLGA纳米粒对HepG2细胞迁移和侵袭影响的实验研究

发布时间：2017-07-06 22:14

  本文关键词：AFP单抗修饰的载DCN PLGA纳米粒对HepG2细胞迁移和侵袭影响的实验研究

  更多相关文章： AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒 迁移 侵袭 AFP RhoC

【摘要】：目的:探讨AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对肝癌细胞株Hep G2细胞迁移和侵袭能力的影响及其相关分子机制。方法:将培养的Hep G2细胞随机分为A、B、C、D、E五个组,其中A组为未予任何处理的Hep G2细胞对照组(未处理组),B组为用含空质粒的PLGA纳米粒处理的对照组(空白组),C、D和E组分别为用5μg/ml(低浓度)、10μg/ml(中浓度)和15μg/ml(高浓度)AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理的实验组。1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞迁移和侵袭的影响1.1采用细胞划痕实验检测不同浓度AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞后对其迁移能力的效应作用。1.2采用Transwell小室实验检测不同浓度AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞后对其侵袭能力的效应作用。2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒抑制Hep G2细胞迁移和侵袭分子机制的初步研究2.1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞24h后,利用RT-PCR方法检测AFP和Rho C分子m RNA转录情况。2.2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒处理Hep G2细胞24h后,利用ELISA法检测AFP和Rho C蛋白水平表达情况,用Western Blot法检测Rho C蛋白水平表达情况。结果:1 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞迁移和侵袭的影响1.1划痕实验结果表明,未处理组与空白组细胞在划痕24h后,划痕宽度分别为308.62±5.89μm和298.28±5.74μm,两者之间差异没有统计学意义(P0.05)。实验组细胞经不同浓度AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒作用后的划痕宽度值明显高于对照组(实验组纳米粒浓度由低到高其划痕宽度值分别为383.47±6.87μm、401.01±4.25μm、415.29±11.93μm),差异有显著统计学意义(P0.001)。提示AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞迁移能力有抑制作用。1.2 Transwell小室实验结果表明,未处理组与空白组细胞在Transwell小室中穿透膜的细胞数分别为70.67±1.16/视野和66.67±2.08/视野,两者之间差异无统计学意义(P0.05)。而实验组与未处理组和空白组相比,穿透膜的细胞数(纳米粒浓度由低到高穿透膜的细胞数分别为62.00±3.61/视野、59.33±1.53/视野和53.33±2.08/视野),经统计学处理,差异有高度显著性(P0.001)。表明AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞侵袭能力有抑制作用。2 AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒抑制Hep G2细胞迁移和侵袭分子机制的初步研究2.1 AFP和Rho C分子m RNA转录水平2.1.1 AFP分子m RNA转录水平经灰度分析结果显示,未处理组和空白组Hep G2细胞AFP m RNA灰度值分别为1.00±0.03和1.05±0.08,二者比较,差异无统计学意义(P0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞AFP m RNA灰度值低于对照组(分别为0.93±0.07、0.68±0.04和0.57±0.03),低浓度组与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05),中、高浓度组与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。2.1.2 Rho C分子m RNA转录水平经灰度分析结果显示,未处理组和空白组细胞Rho C m RNA灰度值分别为1.02±0.04、1.03±0.07,二者比较,差异无统计学意义(P0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞Rho C m RNA灰度值明显低于对照组(分别为0.42±0.04、0.38±0.02和0.38±0.02),差异有显著统计学意义(P0.001)。2.2 AFP和Rho C的蛋白表达2.2.1 ELISA检测AFP结果显示,未处理组与空白组细胞AFP的蛋白浓度分别为2.40±0.25、2.51±0.31,差异无统计学意义(P0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞AFP蛋白浓度值低于对照组(分别为2.01±0.21 ng/ml、1.01±0.11 ng/ml、0.49±0.07ng/ml),差异有统计学意义(P0.05)。2.2.2 ELISA检测Rho C结果显示,未处理组与空白组细胞Rho C的蛋白浓度分别为98.76±3.04pg/ml、100.75±4.19pg/ml,二者差异无统计学意义(P0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞Rho C蛋白浓度值显著低于对照组(分别为86.63±2.60pg/ml、47.37±2.51 pg/ml、39.78±2.47 pg/ml),差异有显著统计学意义(P0.001)。2.2.3 Western Blot检测Rho C结果显示,未处理组与空白组细胞Rho C灰度值分别为1.02±0.05、1.02±0.03,差异无统计学意义(P0.05)。实验组(纳米粒浓度由低到高)细胞Rho C灰度值低于对照组(分别为0.85±0.01、0.70±0.02、0.62±0.02),差异有统计学意义(P0.05)。结论:AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒对Hep G2细胞的迁移和侵袭能力有抑制作用。该AFPm Ab-PLGA-rh DCN纳米粒可下调AFP和Rho C分子的表达。
【关键词】：AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒 迁移 侵袭 AFP RhoC
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用缩写词中英文对照表12-13
• 前言13-15
• 第一部分 AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒对HepG2 细胞迁移和侵袭力的影响15-21
• 1 材料与方法15-18
• 1.1 细胞、纳米粒15
• 1.2 主要实验试剂15-16
• 1.3 主要仪器与设备16
• 1.4 细胞培养16
• 1.5 实验分组16
• 1.6 细胞划痕实验16
• 1.7 bTranswell小室侵袭实验16-17
• 1.8 统计学方法17-18
• 2 结果18-21
• 2.1 bAFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒对HepG2 细胞迁移能力的影响18-19
• 2.2 bAFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒对HepG2 细胞侵袭能力的影响19-21
• 第二部分 AFPmAb-PLGA-rh DCN纳米粒抑制HepG2 细胞迁移和侵袭分子机制的初步研究21-37
• 1 材料与方法21-32
• 1.1 细胞、纳米粒21
• 1.2 主要实验试剂21-24
• 1.3 主要仪器与设备24
• 1.4 细胞培养24-25
• 1.5 实验分组25
• 1.6 AFP与RhoC mRNA转录水平的测定25-29
• 1.7 AFP与RhoC蛋白表达水平的测定29
• 1.8 RhoC蛋白表达水平的westernblot分析29-31
• 1.9 统计学方法31-32
• 2 结果32-37
• 2.1 各实验组的mRNA转录水平32-33
• 2.2 AFP和RhoC的蛋白表达33-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-48
• 参考文献46-48
• 致谢48-49
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果49-50
• 个人简历50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 袁媛;王川;姜政;王丕龙;;pEGFP-N1-DCN重组质粒抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和侵袭[J];第三军医大学学报;2011年07期

2 杨显富;龙先德;;原发性肝癌复发转移的研究进展综述[J];河南外科学杂志;2012年02期

3 李丹丹;孙维敏;丁克俭;;聚乳酸羟基乙酸纳米微球在肿瘤药物递送中的应用[J];生物技术通报;2012年02期

4 曹茂开,赵文明,侯云德;饰胶蛋白(Decorin)基因的cDNA克隆与表达[J];西安医科大学学报(中文版);2000年06期

5 上官建营;窦科峰;李霄;胡小军;张福琴;雍召生;怓振宇;;核心蛋白聚糖在原发性肝癌中的表达[J];世界华人消化杂志;2009年14期

6 曾萍;彭明利;徐溢;;PLGA微粒/纳米粒基因载体的研究进展[J];药学学报;2010年11期

7 罗荣城;陈逢生;;肝癌2009年临床研究进展与展望[J];中国处方药;2010年01期

8 韩旭;王玲玲;;核心蛋白聚糖基因改造及真核表达载体的构建[J];中国老年学杂志;2013年22期

9 宋向明;赵瑜;田长富;;肿瘤基因治疗的病毒载体研究进展[J];医学综述;2014年06期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 王松梅;新型抗肿瘤转移多肽（β肽）的基因工程制备及其生物学效应[D];复旦大学;2005年

2 王伟;RhoC调控肝细胞癌侵袭转移和新生血管生成的体内外研究[D];中南大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 石祥广;在具有高转移倾向的非小细胞肺癌细胞中，+58CpG位点的甲基化能够降低DCN基因的表达从而增强TGF-β信号通路[D];苏州大学;2014年

，

本文编号：527998