去乙酰化酶SirT3与烯醇化酶ENO1关系及功能研究

发布时间：2017-07-15 21:34

  本文关键词：去乙酰化酶SirT3与烯醇化酶ENO1关系及功能研究

  更多相关文章： ENO1 相互作用 SirT3 去乙酰化 蛋白质分泌

【摘要】：ENO1是烯醇化酶,在糖酵解的过程中起重要作用,负责催化2-磷酸甘油酸形成高能化合物磷酸烯醇式丙酮酸。早期研究表明ENO1是肿瘤抑制因子,近几年,研究表明ENO1可能参与癌症的发生发展和转移等多个环节,ENO1基因是重要的原癌基因。ENO1在癌症患者外周血和肿瘤细胞系中表达水平很高,具有潜在肿瘤诊断价值。SirT3为去乙酰化酶,主要分为FLSirT3和ShortSirT3。近几年SirT3因其对各种非组蛋白去乙酰化作用受到越来越多关注。目前,已发现位于线粒体中的Short SirT3,对很多新陈代谢相关酶进行去乙酰化修饰,但细胞质中FLSirT3的底物和功能已知较少。本文首次发现细胞质中FL SirT3与ENO1相互结合,通过免疫共沉淀和体外结合实验,证实FL SirT3与ENO1无论在体内还是体外都直接结合。然后本文发现FL SirT3主要结合在ENO1 376-434氨基酸区域内,并对ENO1进行去乙酰化修饰。最后本文发现FLSirT3可能通过对ENO1去乙酰化修饰,调控ENO1的分泌,对ENO1的分泌有促进作用。已发现ENO1在很多肿瘤患者血液中高表达,提示ENO1可作为肿瘤标记物,具有潜在医学诊断价值。本文的发现为ENO1作为肿瘤标记物的研究提供了一些理论依据,也为FL SirT3的功能研究提供了新思路。
【关键词】：ENO1 相互作用 SirT3 去乙酰化 蛋白质分泌
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.4
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 第一章 绪论10-22
• 第一节 ENO1的概述10-16
• 1.1 ENO1简介10
• 1.2 ENO1基因结构和功能10-11
• 1.3 ENO1蛋白结构和功能11-16
• 1.4 ENO1蛋白翻译后修饰16
• 第二节 SirT3概述16-22
• 2.1 SirT3简介16-17
• 2.2 SirT3蛋白结构和分布17-19
• 2.3 SirT3蛋白剪切体形式19
• 2.4 SirT3蛋白生物学功能19-22
• 第二章 实验材料和方法22-32
• 第一节 实验材料22-24
• 1.1 细胞株和菌株22
• 1.2 质粒载体和引物22-23
• 1.3 耗材和仪器23
• 1.4 实验试剂和药品23-24
• 1.5 抗体24
• 第二节 实验原理与方法24-32
• 2.1 质粒构建技术24
• 2.2 细胞培养技术24-25
• 2.3 细胞转染技术25-26
• 2.4 慢病毒包装与感染技术26-27
• 2.5 细胞免疫荧光技术27
• 2.6 蛋白质免疫印迹技术27-28
• 2.7 免疫共沉淀技术28
• 2.8 GST融合诱导蛋白表达实验28-29
• 2.9 蛋白质体外结合实验29-30
• 2.10 分泌蛋白实验30
• 2.11 细胞迁移实验30-32
• 第三章 结果与分析32-49
• 第一节 SirT3与ENO1相互作用的研究32-38
• 1.1 体外纯化SirT3蛋白32-33
• 1.2 质谱分析SirT3结合蛋白33-34
• 1.3 初步发现ENO1与SirT3的结合34-35
• 1.4 ENO1与SirT3共定位35-36
• 1.5 ENO1与SirT3细胞内结合36-37
• 1.6 ENO1与SirT3细胞外结合37-38
• 第二节 SirT3与ENO1结合区域的研究38-40
• 第三节 SirT3对ENO1去乙酰化修饰40-43
• 第四节 SirT3调控ENO1的分泌43-49
• 4.1 ENO1的分泌条件43-44
• 4.2 分泌条件下ENO1与SirT3相互作用的变化44-45
• 4.3 SirT3表达高低对ENO1分泌的影响45-47
• 4.4 SirT3对ENO1片段分泌的影响47-49
• 第四章 总结与讨论49-52
• 第一节 总结49-50
• 第二节 讨论50-52
• 参考文献52-58
• 附录Ⅰ 英文缩写58-59
• 附录Ⅱ 硕士期间参与发表论文情况59-60
• 致谢60

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5 高s，

本文编号：545895